繼上周整理的泛素化蛋白快速富集純化的解決方案后，最近又有客戶問“我想在體外檢測組織中的一個(gè)蛋白是否在處理因素作用后發(fā)生泛素化，請問有這方面的實(shí)驗(yàn)方法嗎，或者試劑盒嗎？”作為泛素研究領(lǐng)域的專家，LifeSensors可為您提供全面的泛素研究解決方案，如何鑒定靶蛋白是否發(fā)生泛素化修飾？你問了，我安排！

 

 

       如何判斷蛋白是否泛素化? 是哪種類型的泛素化修飾？ UbiTest可以給您答案。

 

       UbiTest檢測原理：先通過TUBEs富集純化樣本中的泛素化總蛋白，隨后，將分離到的泛素化蛋白經(jīng)或者不經(jīng)去泛素化酶DUBs處理，（+）/（-）DUBs處理的蛋白樣本用靶蛋白的特異性抗體進(jìn)行免疫印跡（WB）分析，通過條帶比對分析實(shí)現(xiàn)對泛素化蛋白的定性及半定量檢測。

 

 

 

       實(shí)例分析==＞

 

       樣本：Jurkat細(xì)胞裂解液

 

       實(shí)驗(yàn)?zāi)康模篗DM2和TNF-R1蛋白是否泛素化

 

       實(shí)驗(yàn)流程：通過TUBEs富集純化樣本中的泛素化總蛋白，經(jīng)去泛素化酶DUBs處理，后，用靶蛋白的特異性抗體進(jìn)行WB檢測

 

 

       檢測抗體：MDM2抗體

 

       Lane 1: 富集純化的蛋白樣本不經(jīng)DUBs處理

       Lane 2: 富集純化的蛋白經(jīng)廣譜型的DUBs處理（可以去除所有類型的多聚泛素鏈）

       Lane 3: 富集純化的蛋白經(jīng)特異性針對K48-泛素鏈的去泛素化酶處理（只能水解K48-泛素鏈）

 

       結(jié)果：Lane 2的條帶信號（~55kda）與Lane 1相比明顯增強(qiáng)，說明MDM2被泛素化修飾了

 

       Lane 3的條帶信號（~55kda）與Lane 1相比有所增加，但是比Lane 2的信號明顯減弱，說明特異性針對K48-泛素鏈的去泛素化酶并沒有水解掉靶蛋白近端的泛素，或者說MDM2還存在其他連接類型的多聚泛素鏈。

 

 

       檢測抗體：TNF-R1抗體

 

       Lane 1: 富集純化的蛋白樣本不經(jīng)DUBs處理

       Lane 2: 富集純化的蛋白經(jīng)廣譜型的DUBs處理（可以去除所有類型的多聚泛素鏈）

       Lane 3: 富集純化的蛋白經(jīng)特異性針對K63-泛素鏈的去泛素化酶處理（只能水解K63-泛素鏈）

 

       結(jié)果：Lane 2的條帶信號（~50kda）與Lane 1相比明顯增強(qiáng)，說明TNF-R1被泛素化修飾了

 

       Lane 3的條帶信號（~140kda）與Lane 1相比明顯減弱，Lane 3的條帶信號（~50kda）與Lane 1相比有所增強(qiáng)，說明TNF-R1的泛素化類型為K63，但是還存在其他類型的泛素化修飾，所以比Lane 2的信號弱很多。

 

貨號	名稱	產(chǎn)品說明
UM411	UbiTest Agarose-TUBE Elution Kit	鑒定靶蛋白是否泛素化
UM411M	UbiTest Magnetic TUBE Elution Kit
UM413	K63 Linkage Specific UbiTest – Agarose TUBE Elution Kit	鑒定靶蛋白是否泛素化以及是否存在K63-泛素化修飾
UM413M	K63 Linkage Specific UbiTest – Magnetic TUBE Elution Kit
UM414	K48 Linkage Specific UbiTest – Agarose TUBE Elution Kit	鑒定靶蛋白是否泛素化以及是否存在K48-泛素化修飾
UM414M	K48 Linkage-Specific UbiTest – Magnetic TUBE Elution Kit
UM412	Linkage Profiling UbiTest – Agarose TUBE Elution Kit	鑒定靶蛋白是否泛素化以及是否存在K63/K48-泛素化修飾
UM412M	Linkage-Specific UbiTest – Magnetic TUBE Elution Kit

 

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