Trevigen彗星實驗操作全程選購指南，帶你來看“彗星雨”！
彗星實驗（Comet assay）也被稱為單細胞凝膠電泳實驗（Single cell gel electrophoresis，SCGE），是一種在單細胞水平上檢測DNA損傷的技術。當各種內(nèi)源性和外源性 DNA 損傷因子誘發(fā)細胞 DNA 鏈斷裂時，其超螺旋結構受到破壞，在細胞裂解液作用下，細胞膜、核膜等膜結構受到破壞，細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、RNA 以及其他成分均擴散到電解液中，而核DNA由于分子量太大不能進入凝膠而留在原位。電泳過程中，如果DNA沒有損傷，則將停留在原位，染色后呈圓形的熒光團，無拖尾出現(xiàn)。如果DNA受損，斷裂的碎片進入到凝膠中，在電場的作用下，DNA碎片離開原位向陽極遷移，形成拖尾。DNA受損越嚴重，斷裂越多，產(chǎn)生的碎片就越多、越小，則向陽極遷移的DNA碎片量就越多，遷移距離也越長，熒光染色后就能看見“彗星”樣尾長并且熒光強度增強。
目前有兩種常見的彗星實驗檢測方式——堿性處理&中性處理。在堿性處理條件下，DNA發(fā)生變性，因而可檢測包括單鏈及雙鏈斷裂在內(nèi)的所有DNA 損傷；在中性處理條件下，DNA 維持雙鏈構象，因而僅可以檢測雙鏈斷裂。
實驗大體流程如下：
- 制備單細胞懸浮液，在 37℃ 條件下，懸浮液與低熔點瓊脂糖（LM瓊脂糖）混合；
- 將瓊脂糖、細胞混合物涂布在預處理的載玻片上；
- 4℃條件下用裂解液處理30-60min或過夜，裂解液由去垢劑及高鹽溶液組成，可去除多余的細胞膜及組蛋白；
- 將載玻片浸入電泳溶液中；
- 進行凝膠電泳，隨后，中和載玻片，待LM瓊脂糖完全干燥后，用熒光染料染色，并于熒光顯微鏡下觀察DNA損傷程度。
注：最常用的熒光染料是SYBR Gold，但熒光染料的觀察需要熒光顯微鏡。如果選擇銀染，使用標準的光學顯微鏡觀察即可。
圖片處理
在拍照時以tif格式保存圖片，然后用CASP彗星分析軟件分析，如下圖是軟件打開的界面➙
接下來➙導入圖片，用白色畫框選中要分析的區(qū)域。下圖中的“調(diào)整”項可以調(diào)整畫框的位置以包含整個細胞，開始分析前要點擊“開始”，然后點“分析”，再點“保存”，這樣一張圖的數(shù)據(jù)就分析完了，數(shù)據(jù)會保存在系統(tǒng)里。點擊“翻頁”可以繼續(xù)分析下一張圖。
分析完所有圖片后導出數(shù)據(jù)到Excel表格，保留TailDNA%（尾部DNA百分含量），TailLength（尾長），TailMoment（尾矩）三列數(shù)據(jù)。根據(jù)細胞尾部的DNA百分含量（即TailDNA%），將采集的細胞圖像分為5級：彗星尾部熒光強度（TailDNA%）占總強度為0-6%是0級；6.1%-17.0%是1級；17.1%-35.0%是2級；35.1%-60.0%是3級；60.1%-100.0%是4級。
彗星率等于彗星細胞數(shù)目（除去0級細胞）占總細胞數(shù)目的百分比。任意值等于各等級細胞的百分比與其對應的級別號的乘積之和，它可以綜合反映細胞的DNA損傷情況。最后，綜合分析Tail DNA%、Tail length、Tail moment、彗星率和任意值，共5個指標比較細胞的DNA損傷程度。
作為一家專注于開發(fā)細胞凋亡、DNA損傷和修復、腫瘤細胞功能與行為等相關研究產(chǎn)品的美國生物技術公司，Trevigen可為您提供彗星實驗全線產(chǎn)品：
CometAssay®彗星分析專用玻片
| 貨號 | 名稱 | 規(guī)格 |
| 4250-004-03 | CometSlide™(2 Well) | 2孔樣式玻片 * 2片 |
| 4250-050-03 | CometSlide™(2 Well) | 2孔樣式玻片 * 25片 |
| 4250-200-03 | CometSlide™(2 Well) | 2孔樣式玻片 * 100片 |
| 4252-040-01 | CometSlide™(20 Well) | 20孔樣式玻片 * 2片 |
| 4252-200-01 | CometSlide™(20 Well) | 20孔樣式玻片 * 10片 |
| 4252-500-01 | CometSlide™(20 Well) | 20孔樣式玻片 * 20片 |
| 4252-02K-01 | CometSlide™(20 Well) | 20孔樣式玻片 * 100片 |
| 4253-096-03 | CometSlide™(96Well) | 96孔樣式玻片 * 1片 |
CometAssay® 彗星分析銀染試劑盒
| 貨號 | 名稱 | 規(guī)格 |
| 4254-200-K | Silver Staining Components | 200次銀染分析 |
| 4251-050-K | CometAssay®Silver Kit | 2孔樣式玻片 * 25片和50次銀染分析 備注： 包括4250-050-k（彗星實驗試劑） + 4254-200-K（銀染試劑） |
CometAssay®彗星分析試劑盒
| 貨號 | 名稱 | 規(guī)格 |
| 4250-050-K | CometAssay® Kit (25 x 2 well slides) | 50次分析 |
| 4252-040-K | CometAssay® Kit (2X20 well slides) | 40次分析 |
| 4253-096-K | CometAssay® Kit (1X96 well slides) | 96次分析 |
CometAssay®彗星電泳檢測系統(tǒng)
| 貨號 | 名稱 | 產(chǎn)品組分 |
| 4250-050-ES | CometAssay® Electrophoresis System | 彗星電泳儀 |
| 4250-050-ESK | CometAssay® 2 Well ES Unit w/ Starter Kit | 彗星電泳儀&25個2孔玻片式彗星分析試劑盒 |
| 4250-050-ESK-PS1 | CometAssay® 20 Well ES Unit w/ Starter Kit and Power Supply
|
彗星電泳儀& 25個2孔玻片式彗星分析試劑盒&電源 |
| 4252-040-ESK | CometAssay® 20 Well ES Unit w/ Starter Kit | 彗星電泳儀&25個2孔玻片彗星分析式試劑盒 |
| 4252-040-ESK-PS1 | CometAssay® 20 Well ES Unit w/ Starter Kit plus NA Power Supply | 彗星電泳儀& 2個20孔玻片式彗星分析試劑盒&電源 |
| 4253-096-ESK | CometAssay® 96 Well ES Unit w/ Starter Kit | 彗星電泳儀&1個96孔玻片式彗星分析試劑盒 |
| 4253-096-ESK-PS1 | CometAssay® 96 Well ES Unit w/ Starter Kit plus NA Power Supply | 彗星電泳儀&電源與1個96孔玻片式彗星分析試劑盒 |
備注：以上套裝電源為北美制氏電源，其他制氏類型電源（例如英國制式），詳詢艾美捷科技
除了以上試劑盒外，Trevigen還可單獨提供彗星實驗的各種試劑組分，例如：低熔點瓊脂糖CometAssay® LMAgarose）、細胞裂解液（CometAssay® Lysis Solution）。
Trevigen是一家快速成長的美國生物技術公司，專注于細胞凋亡、DNA損傷和修復、腫瘤細胞功能與行為等方面研究的腫瘤研究產(chǎn)品和服務。作為 Trevigen在中國區(qū)域的總代理，艾美捷與Trevigen一道為中國的科研工作者提供最好、最新的氧化應激、細胞損傷和腫瘤細胞行為研究等領域內(nèi)的 優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品和技術服務。
如果您對上述產(chǎn)品及方案感興趣，請致電400-6800-868至艾美捷科技有限公司垂詢彗星實驗的相關產(chǎn)品，或索取最新的產(chǎn)品資料。
