ACEA Quanteon流式細胞儀在檢測循環(huán)腫瘤細胞CTCs上的應用
循環(huán)腫瘤細胞(Circulating Tumor Cells, CTCs)是指自發(fā)或因診療操作自實體腫瘤原發(fā)灶或轉移灶脫落進入外周血循環(huán)的腫瘤細胞，是腫瘤復發(fā)和發(fā)生遠端轉移的關鍵因素。CTCs檢測有助于惡性腫瘤的早期診斷、療效監(jiān)測、預后判斷、耐藥性評估等，其臨床應用價值已被廣泛認可【1,2】。由于CTCs的稀有性，流式細胞術鑒定CTCs需有較高靈敏度。
實驗設計
CTCs在患者血液中的含量非常稀少，大約每106~107個白細胞中僅1個至幾個CTCs存在，靈敏度一直是其檢測及應用的主要障礙。在眾多文獻報道中，人們常利用腫瘤細胞摻入試驗評價CTCs檢測方法/系統(tǒng)的靈敏度、特異性、準確性、重復性等指標。
本研究選用高表達EpCAM的結腸癌細胞株（SW620）作為摻入細胞（圖1），第一部分將不同數(shù)量（0～256個）SW620細胞摻入到1×106個正常人PBMCs中，用ACEA Quanteon流式細胞儀檢測SW620細胞的實際個數(shù)，確定儀器檢測CTCs的靈敏度。
一、SW620細胞表面EpCAM表達鑒定
圖1. SW620細胞表面EpCAM表達鑒定。將新鮮血（2mL）或摻有SW620細胞的新鮮血（1000個/2mL）用Ficoll-Paque PLUS淋巴細胞分離液（GE healthcare,17-1440-02）分離PBMCs后，在以上樣本以及單獨SW620細胞中分別加入抗CD45-FITC和抗EpCAM-APC抗體孵育，設同型抗體對照，在ACEA Quanteon流式細胞儀上測試，數(shù)據(jù)采用相同設門策略分析。a. SW620細胞用IgG1 FITC和IgG2b APC同型抗體染色的結果； b-d. SW620細胞、新鮮血和摻有SW620的新鮮血用CD45-FITC和EpCAM-APC抗體染色的結果。
二、ACEA Quanteon可檢測到106個正常人白細胞中的1個腫瘤細胞
圖2. 靈敏度分析。收集對數(shù)生長期的SW620細胞，標記 EpCAM-APC熒光抗體，設同型抗體對照，冰上孵育60min，用含0.5%BSA的D-PBS洗兩遍；將染色后的SW620細胞按0，2，4，8，16，32，64，128，256，512個（體積20μL）分別摻入2×106個PBMCs（體積180μL）中，渦旋混勻（理論上，每100μL中含SW620細胞數(shù)：0，1，2，4，8，16，32，64，128，256），在ACEA Quanteon流式細胞儀上中速采集100μL，記錄EpCAM+細胞數(shù)量。A. 設門策略。FSC-SSC散點圖上設P1門去除碎片和雜信號，基于P1門，在散點圖上表現(xiàn)為EpCAM+的細胞即為摻入的SW620細胞；B. ACEA Quanteon流式細胞儀上的測試結果；
結論
ACEA Quanteon流式細胞儀檢測結果顯示，在不同細胞數(shù)量摻入水平，實際檢出細胞數(shù)量與理論數(shù)量之間呈現(xiàn)良好的線性關系，靈敏度為0.0001%，即可檢測到106個正常人白細胞中的1個腫瘤細胞，證明ACEA Quanteon流式細胞儀在檢測CTCs方面具有高靈敏度。
參考文獻
[1] 循環(huán)腫瘤細胞檢測與臨床應用進展。趙倩雯，司徒博，鄭 磊。南方醫(yī)科大學學報, 2017, 37(10): 1423-1426
[2] 循環(huán)腫瘤細胞的研究進展。王宜文，胡孔旺。安徽醫(yī)科大學學報，2017，52(12)：1897-1900
*文章來自艾森生物
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