​根據美國疾病控制與預防中心(CDC)的數據，在2017年至2020年的250起多州食源性疫情中，沙門氏菌被確定為186例的主要原因。以前的研究發(fā)現，多種農業(yè)做法是導致沙門氏菌爆發(fā)的污染源，包括使用動物糞便作為肥料和被污染的灌溉用水。眾所周知，水是新鮮農產品微生物污染的儲存庫，也是病原體傳播的載體。因此，了解水中血清型沙門氏菌的生存能力對減少其致病性傳播具有重要意義。

在這項研究中，評估了12種血清型腸沙門氏菌亞種的生存能力。使用納米流式細胞術（Apogee A50）在RAPID-B（一項專利技術）assay中和TSA (Tryptic Soy Agar)平板分別計數，在4℃和25℃無核酸酶的水中培養(yǎng)160天。結果表明在25°C培養(yǎng)時，在蒸餾水中培養(yǎng)160天后，Apogee納米流式儀分析所有12種血清型均保持活力，而傳統(tǒng)的平板計數未能檢測到10種血清型。此外，研究結果表明，4°C構建了一個更有利的環(huán)境，沙門氏菌可以在沒有營養(yǎng)的情況下長時間存活。然而，在這種條件下，沙門氏菌對所有測試的抗生素和苯扎氯銨 (BZK)表現出更高的敏感性。這項研究提供了沙門氏菌在不同溫度下的長期生存能力，并強調需要強大的工具來檢測這種微生物，以降低通過無核酸酶的水傳播食源性病原體的風險。

通過連續(xù)的稀釋(100和10 CFU/mL)比較沙門氏菌，評估了納米流式細胞術檢測區(qū)分活細胞和死細胞的能力。在無核酸酶的水中，在4℃和25℃下保存150天的懸浮液（圖1）。

圖1：RAPID-B TPC法活/死細胞流式細胞圖:(A)空白;(B)在4°C條件下，稀釋10 CFU/mL，第150天;(C)在4°C下，稀釋100 CFU/mL，第150天;(D)在25°C條件下，稀釋10 CFU/mL，第150天;(E)在25°C下，稀釋100 CFU/mL，第150天

為了支持RAPID-B TPC測定，流式細胞術發(fā)現在兩種溫度下，所有沙-門-氏-菌-血清型在水中存活160天后，我們使用UP Broth和1/10 × TSB富集技術進行復蘇步驟來評估恢復情況。在25°C保存的沙-門-氏-菌-血清型根據處理表現出不同的恢復模式。事實上，血清型S. Urbana、S. Dublin、S. Kentucky、S. Heidelberg和S. Enteritidis(分別為2、3、6、10和11)在通用預富集(UP)肉湯中沒有恢復(圖5A)。在4°C下，所有12種血清型在UP肉湯中培養(yǎng)過夜，并由克隆在TSA板上，均顯示生長(圖5B)。然而，使用富集技術，在4°C條件下，所有沙-門-氏-菌-血清型在TSA板和稀釋的TSA板上都恢復良好(圖5B,D)。相比之下，在1/10 × TSB中預富集24 h的12種血清型中，有11種在25°C和4°C條件下均在1/10 × TSA板上生長(圖5C)。1/10 × TSB未檢測鼠-傷-寒-沙-門-氏-菌-。

結論：經RAPID-B流式細胞術分析，沙-門-氏-菌血清型可在無菌無核酸酶的水中存活160天以上。使用RAPID-B TPC檢測，在4°C水中保存160天后，分析的沙-門-氏-菌血清型數量減少，但仍高于25°C保存的相同血清型。為了確認，用UP肉湯和1/10×TSB（）預先富集，在TSA（胰蛋白酶大豆瓊脂）中復蘇了所有篩選的血清型。沙-門-氏-菌-血清型顯示出細胞大小的減小，并改變了它們的代謝譜，以便在低營養(yǎng)或無營養(yǎng)的環(huán)境中存活更長的時間。在緊張的環(huán)境條件下，這種由RAPID-B流式細胞術可以測定的活細胞計數和檢測活躍生長的細胞，以及休眠和/或死亡細胞。在未來，RAPID-B基因檢測將被開發(fā)用于檢測特定的沙-門-氏-菌-血清型。

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參考文獻
A flow cytometric assay to detectviability and persistence ofSalmonella enterica subspenterica serotypes in nuclease-free water at 4 and25°C
Frontiers in Microbiology，TYPE Original Research
PUBLISHED 16 February 2024Do1 10.3389/fmicb.2024.1342478)Check for updates
OPEN ACCESS
EDITED BYPratik Banerjee,.University of lllinois at Urbana-Champaign.United States
REVIEWED BYMd Latiful Bari,.University of Dhaka, BangladeshAlexey V. Rakov.Central Research Institute of Epidemiology(CRIE), Russia
 

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