FastBlue蛋白染色液說明書
FastBlue蛋白染色液說明書
儲存條件
常溫貯存，開封后一年有效。如4℃貯存，會有結(jié)晶形成，37℃溫浴融化后可繼續(xù)使用。
● 產(chǎn)品簡介
FastBlue蛋白染色液是以考馬斯亮藍G-250為主要成分，采用新配方配置而成。可用于SDS-PAGE或非變性PAGE膠（native gel）的快速染色。
特點：方便快捷-不用漂洗，不用加熱，不用脫色，不用固定，條帶2分鐘可見。
靈敏度高-檢測下限10ng蛋白
兼容性好-適用于變性和非變性膠以及質(zhì)譜分析
綠色環(huán)保-不含甲醇，冰醋酸
● 用前必讀：
1 使用前如發(fā)現(xiàn)瓶中有少許沉淀，請混勻后使用。
2以下“使用方法”是針對0.75mm厚度，10×10cm凝膠染色程序。
● 使用方法：
1. 將電泳后的PAGE膠取下放入塑料容器中，用適量蒸餾水漂洗一下。
2. 棄蒸餾水，加入適量染色液（以剛剛覆蓋過膠面為適），搖床上常溫搖動，根據(jù)下表確定染色時間。
|
待檢測蛋白量 |
染色時間 |
|
＞1 μg |
2分鐘 |
|
100ng-1μg |
10分鐘 |
|
10ng-100ng |
60分鐘 |
3. 觀察記錄結(jié)果。
● 附：質(zhì)譜處理程序
1. 切下待檢蛋白條帶置于1.5ml離心管中。
2. 加入1ml 30%乙醇或30%丙酮（也可用30%醋酸，但會導(dǎo)致蛋白N端酰基化）。
3. 處理30分鐘。
4. 重復(fù)步驟2，3直到去除所有染料。一般處理2-3次既能完全去除染料。
5. 質(zhì)譜分析。
● 注意事項：
1. 使用方法中的各種參數(shù)僅針對面積8×10cm或10×10cm，厚度0.75mm的凝膠，如果使用更大面積或更厚的凝膠，請加入更多的染色液并延長染色的時間。
2. 常規(guī)染色所需的漂洗，固定，脫色步驟都無必要。
3. 本染色液可以重復(fù)利用1-2次，敏感性會有輕微下降，請延長染色時間。
4. 本染色液有輕微腐蝕性，請帶手套操作。使用后，請蓋好瓶蓋，常溫密封保存。
● 問題解答：
|
Q1 FastBlue染膠的最佳溫度是多少？ |
A1 為達到最佳的染色效果，推薦常溫（20-25℃）染色。 |
|
Q2 FastBlue溶液需要低溫貯存嗎？ |
A2 Fastblue不需要低溫貯存，常溫貯存（20-25℃）即可。4-8℃貯存，F(xiàn)astBlue會有結(jié)晶生產(chǎn)，37℃溫浴融化后可繼續(xù)使用。 |
|
Q3 FastBlue的染色原理是什么？ |
A3 FastBlue染色原理與經(jīng)典考馬斯亮藍G250染色原理相同（與蛋白質(zhì)中堿性氨基酸結(jié)合），優(yōu)點是更加快速和更高的靈敏度。 |
|
Q4 FastBlue染色后，凝膠可以用蒸餾水保存嗎？ |
A4 可以，蒸餾水保存最為簡單，也可以保存在稀釋的冰醋酸中。 |
|
Q5 FastBlue染色后的凝膠能做質(zhì)譜分析嗎？ |
A5 可以。請參閱“質(zhì)譜處理程序” |
|
Q6 FastBlue染色的凝膠能做Weatern Blot嗎？ |
A6 不可以。蛋白的染色是不可逆的，染色的凝膠不能用作下游的轉(zhuǎn)膜操作。 |
|
Q7 Fastblue能重復(fù)使用嗎？ |
A7 FastBlue可以重復(fù)使用2-3次，但靈敏度有所下降，可以通過延長染色時間來彌補。 |
|
Q8 為什么凝膠過夜染色后條帶出現(xiàn)涂抹狀拖尾？ |
A8 FastBlue過夜染色不會對凝膠過度染色。出現(xiàn)抹涂狀拖尾原因是上樣量太大，因為FastBlue染色靈敏度較高。另外，分子量較小的蛋白在過夜染色中會有擴散現(xiàn)象，我們推薦染色最好在60分鐘內(nèi)完成。 |
|
Q9 FastBlue有固定凝膠的作用嗎？ |
A9 FastBlue是水系溶液，沒有固定凝膠的作用。然而，由于染色會在60分鐘內(nèi)完成，染色前無需對凝膠進行固定。 |
