2×CTAB提取緩沖液

● 產(chǎn)品編號(hào)及規(guī)格：

● 產(chǎn)品介紹：

    CTAB (hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化銨)，是一種陽(yáng)離子去污劑,具有從低離子強(qiáng)度溶液中沉淀核酸與酸性多聚糖的特性。在高離子強(qiáng)度的溶液中(>0.7mol/L NaCl) CTAB與蛋白質(zhì)和多聚糖形成復(fù)合物而不沉淀核酸。通過(guò)有機(jī)溶劑抽提，去除蛋白、多糖、酚類(lèi)等雜質(zhì)后加入乙醇沉淀即可使核酸分離出來(lái)。

    2×CTAB提取緩沖液成分：2%(w/v)CTAB，100mM Tris (pH 8.0)，20mM EDTA,1.4 MNaCl,，0.2%(v/v) 還原劑(隨用隨加) 。

● 儲(chǔ)存條件：

   室溫貯存一年。加入還原劑后4℃貯存。

● 實(shí)驗(yàn)操作步驟：

1. 2×即用型CTAB提取液配制：

按照終濃度0.2% （v/v）加入還原劑，如100ml 2×CTAB提取緩沖液中加入0.2 ml 還原劑。加入還原劑后的2×即用型CTAB提取液4℃貯存。

2. 取0.2-0.5克新鮮植物材料，于液氮中研磨成粉末。

3. 將粉末轉(zhuǎn)入預(yù)冷的1.5ml離心管中，立即加入0.7 ml 2×即用型CTAB提取緩沖液，65℃水浴30分鐘，間歇混勻。

4. 加入等體積的酚：氯仿：異戊醇(25:24:1)，輕緩顛倒離心管混勻8-10次，常溫12000 rpm 離心10分鐘。

5. 將上清液轉(zhuǎn)入另一1.5ml離心管中，加入等體積酚:氯仿:異戊醇(25:24:1)，顛倒離心管混勻8-10次，常溫12000 rpm離心10分鐘。

6. 將上層水相轉(zhuǎn)入新的1.5 ml離心管中，加入0.6倍體積的冰冷異丙醇，輕柔混勻，冰浴30分鐘。

7. 12000 rpm4℃ 離心10分鐘。

8. 去上清液, 加入1ml 70%乙醇漂洗沉淀，4℃12000 rpm 3分鐘，吸棄乙醇。

9.4℃ 12000 rpm 1分鐘，用移液器吸盡殘余乙醇，超凈臺(tái)吹干沉淀。

注：沉淀不能徹底干燥，否則不好溶解。

10. 加入30-50μl的超純水或TE緩沖液溶解DNA，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>