石蠟切片淀粉樣蛋白（AMYLOID）硫磺素T（thioflavine T）熒光染色試劑盒

產品說明書

主要用途

YIJI石蠟切片淀粉樣蛋白（AMYLOID）硫磺素T（thioflavine T）熒光染色試劑是一種旨在使用標準化的化學分離石蠟方法和硫磺素T染色技術，與淀粉樣蛋白結合，來分析存檔中的石蠟包埋的組織切片中蘋果綠熒光現(xiàn)象的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。主要適用于石蠟包埋組織切片的淀粉樣蛋白檢測。廣泛用于淀粉樣蛋白樣疾病的病理生理的研究。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，熒光清晰。

技術背景

淀粉樣蛋白（AMYLOID）是一種同質性、嗜伊紅性（eosinophilic）、不溶性的纖維蛋白（fibrous protein）聚合體，具有共同的β交叉折疊層（β sheet）組織結構特征，沉積在細胞外。蛋白質錯誤折疊（misfolding），且異常自我聚集將導致淀粉樣變性（amyloidosis），細胞毒纖維沉積，產生組織損傷，進而引起23種不同淀粉樣蛋白綜合癥，超過400種疾病，包括阿茨漢姆癥、巴金森氏癥、II型糖尿病、白內障、朊病毒疾病等。淀粉樣蛋白斑（amyloid plaque）和神經纖維纏結（neurofibrillary tangles；NFT）是淀粉樣蛋白綜合征的病理性特征。硫磺素T（thioflavine T），陽離子苯并噻唑（benzothiazole）衍生物，在鹽酸的參與下，通過脫氫硫甲苯胺（dehydrothiotoluidine）的甲基化而成，是最常用的淀粉樣蛋白熒光探針，體內或體外識別顯示和定量分析纖維化動力學。較之硫磺素S（thioflavine S），硫磺素T更為穩(wěn)定和廣譜，體內檢測更佳，尤其適合在液體狀態(tài)下檢測。一旦與淀粉樣蛋白纖維（寡聚體）結合，其熒光強度（激發(fā)波長440nm，散發(fā)波長490nm），顯著增強，呈現(xiàn)蘋果綠熒光。

產品內容

YIJI脫蠟液（Reagent A）         毫升（自備）

YIJI補水液A（Reagent B）  毫升

YIJI補水液B（Reagent C）  毫升

YIJI補水液C（Reagent D）  毫升

YIJI清理液（Reagent E）  毫升

YIJI染色液（Reagent F）  毫升

YIJI強化液（Reagent G）  毫升

產品說明書  1份

保存方式

保存YIJI染色液（Reagent F）在-20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；YIJI染色液（Reagent F），避免光照；試劑具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證3月

用戶自備

小型染色缸：用于石蠟切片的脫蠟操作

（共聚焦）熒光顯微鏡：用于組織細胞染色后觀察分析

實驗步驟

• 脫蠟處理

• 取出10片待測的石蠟包埋的組織切片（注意：石蠟包埋前，組織切片須用10％甲醛4℃條件下，固定16小時，此步很重要）
• （選擇操作）放進80℃烘箱，孵育30分鐘
• （選擇操作）室溫下靜置15分鐘
• 按下表依次放進小染色缸里孵育

 

染色缸	孵育時間
xx毫升YIJI脫蠟液（Reagent A）	15分鐘
xx毫升YIJI脫蠟液（Reagent A）	15分鐘
xx毫升YIJI脫蠟液（Reagent A）	15分鐘
xx毫升YIJI補水液A（Reagent B）	3分鐘
xx毫升YIJI補水液B（Reagent C）	3分鐘
xx毫升YIJI補水液C（Reagent D）	3分鐘

 

• 小心移去切片上的YIJI補水液C（Reagent D）
• 小心加上xx微升YIJI清理液（Reagent E）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育5分鐘
• 小心移去切片上的YIJI清理液（Reagent E）

二、樣本染色處理

• 小心加上xx微升YIJI染色液（Reagent F），鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育10分鐘，避免光照
• 小心移去切片上的YIJI染色液（Reagent F）
• 小心加上xx微升YIJI清理液（Reagent E）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育1分鐘
• 小心移去切片上的YIJI清理液（Reagent E）
• 小心加上xx微升YIJI強化液（Reagent G），鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育10分鐘 
• 小心移去切片上的YIJI強化液（Reagent G）
• 小心加上xx微升YIJI清理液（Reagent E）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育3分鐘
• 小心移去切片上的YIJI清理液（Reagent E）
• 封片
• 即刻在（共聚焦）熒光顯微鏡下（激發(fā)波長440nm，散發(fā)波長490nm）觀察：

淀粉樣蛋白：呈現(xiàn)蘋果綠熒光

注意事項

• 本產品為50次操作
• 操作時，須帶手套
• 石蠟包埋前，組織切片須用10％甲醛4℃條件下，固定16小時，否則造成樣品支離破碎
• 試劑具有腐蝕性，注意操作安全
• 試劑溶液在樣品表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿樣品表面
• 組織細胞染色完成后，即刻進行熒光顯微鏡觀察 
• 槲皮素（Quercetin）、姜黃色素（curcumin）、 藜蘆醇（resveratrol）等會干擾檢測
• 本公司提供系列淀粉樣蛋白染色試劑產品

 

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩(wěn)定
• 本產品經鑒定熒光清晰