1、GFP-Trap®可識(shí)別的GFP衍生物類型有哪些？
    (1) eGFP, wtGFP, GFP S65T
(2) TagGFP
(3) eYFP, YFP, Venus, Citrin
(4) CFP
不能識(shí)別：TurboGFP，所有的RFPs

 2、RFP-Trap®可識(shí)別的RFP衍生物類型有哪些？
(1) mRFP
(2) mCherry
(3) mOrange
(4) mPlum
(5) mRuby
(6) mKate2
    不能識(shí)別：DsRed、mRFPruby、TagRFP、所有GFPs

 3、Nano-Trap® (GFP-Trap® / RFP-Trap®) 的結(jié)合能力如何？
    Nano-Trap®的結(jié)合能力取決于珠子。每10μL漿液，瓊脂糖珠可結(jié)合2~3μg GFP，磁性顆�？山Y(jié)合0.25-~0.5μg GFP。

 4、可以從GFP-Trap洗脫結(jié)合蛋白么？
    關(guān)于定量洗脫，可以將樣品至于SDS上樣緩沖液中95℃煮10min（詳見protocol），或者在0.2 M的甘氨酸（pH2.5）中孵化0.5~2min，隨后用0.1體積的1M Tris堿中和。

5、是否可以從GFP-Trap洗脫出自然狀態(tài)的結(jié)合蛋白，比如，在凝膠遷移實(shí)驗(yàn)或功能分析實(shí)驗(yàn)中？
    可以嘗試洗脫游離的GFP。但是，請(qǐng)注意，這種方法，不能定量洗脫出目標(biāo)融合蛋白。

 6、怎樣才能避免非特異性的蛋白與GFP-Trap交互作用而結(jié)合？
    關(guān)鍵操作步驟，是在孵化液中稀釋洗滌劑的濃度。我們建議，洗滌劑為終濃度0.1%（如NP-40 或TX-100），且最終體積不少于0.4mL。另外，我們建議，要測(cè)定各種洗滌緩沖液的鹽濃度，使其范圍在150mM-500mM范圍內(nèi)，以去除非特異性結(jié)合的親水性蛋白。

7、在binding過程中，N-端與C-端GFP融合蛋白之間是否存在差異？
    GFP-Trap®對(duì)C-末端的GFP融合蛋白的親和力稍高，若要消除這種差異，可以加長(zhǎng)孵化時(shí)間（1-2h取代15-30min）

 8、是否可以在組織樣品（即變性緩沖液）中直接純化GFP標(biāo)記的融合蛋白？
    原則上，GFP-Trap®即使在惡劣的緩沖條件下（如，RIPA緩沖液，含0.1%SDS或1M尿素），也非常穩(wěn)定。

 9、可結(jié)合的GFP-Trap®珠的GFP結(jié)構(gòu)，是否有大小限制？
    無。

 10、如果在洗脫液中，有剩余的背景怎么辦？
    建議使用Chromotek的blocked particles（bab-20 or bmp-20）對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理。

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