本應用記錄了我們如何使用Spectramax Paradigm 多功能讀扳機執(zhí)行穩(wěn)定,免洗細胞因子實驗,并具有良好的Z因子。
HTRF是由Cisbio試劑公司研發(fā)的多功能技術,用于檢測生物分子間相互作用。它結合了熒光共振能量轉移(FRET)技術和時間分辨熒光(TRF)技術,實現消除半衰期短的背景熒光。這個實驗應用供體和受體熒光染料。當供體和受體之間足夠近的情況下,由光源(如,高能閃爍氙燈)照射產生的供體激發(fā)光就會通過能量轉移機制到受體,反過來作為受體的特定激發(fā)波長。HTRF采用四個特定的熒光染料,可以組合成兼容的供體-受體TR-FRET對。供體為銪元素(Eu3+)和鋱元素(lumi4™- Tb),其長壽命熒光使它們可以應用在時間分辨熒光實驗中。兩種受體已經被研發(fā)用于HTRF實驗,分別是, XL665 and d2。都具有激發(fā)光譜重疊的HTRF供體的發(fā)射光譜。每個都在665nm有一個發(fā)射峰,但這個區(qū)域的波長并不能激發(fā)供體,或者激發(fā)非常弱。最早期的的HTRF受體,XL665,來源于紅藻的藻膽蛋白色素的純化。第二代受體,d2,是一種改進的別藻藍蛋白,比XL665小100倍,用來緩解可能發(fā)生在XL665檢測時的空間位阻問題。