OD600用于量化微生物的生長,實時監(jiān)測細菌、酵母和其他微生物生長,在發(fā)酵過程、抗生素敏感性檢測和重組蛋白的生產(chǎn)等應用中都至關(guān)重要。
微孔板讀板機可使用96 孔板,只需不到200 μL的微生物懸浮液,即可自動測量微生物生長過程,非常適合重復測量多個樣品,并比較不同的培養(yǎng)基條件或菌株。
要獲得高質(zhì)量的OD600數(shù)據(jù),獲得完美的微生物生長曲線,以下幾個條件的優(yōu)化至關(guān)重要。
1.選擇合適的振蕩頻率:
振蕩可防止微生物沉降到容器底部,同時,搖動頻率會影響細胞懸液中營養(yǎng)物質(zhì)和氣體的分布,從而影響生長速率。理想的振蕩設置取決于孔體積、板幾何形狀和微生物的生長要求,因此必須為每個實驗優(yōu)化參數(shù)。
振蕩頻率對大腸桿菌生長曲線的影響 (A) 基于 100 μL/孔的大腸桿菌生長曲線;(B) 基于 300 μL/孔的大腸桿菌生長曲線。
2.選擇合適振蕩模式:
除了振蕩頻率外,應用的振蕩模式也會對微生物的生長速率產(chǎn)生重大影響。與圓周振蕩相比,雙圓周振蕩更有效地混合微生物懸浮液,OD600值增加更快。
搖動模式對大腸桿菌生長曲線的影響
3.選擇孔掃描來減小數(shù)據(jù)的變異
培養(yǎng)基中細胞會不時聚集在一起。這種聚集體會導致OD讀數(shù)的虛假增加。如果聚集體在下次測量時移動,則測得的 OD 值可能會顯著下降,導致曲線上出現(xiàn)尖峰和高的CV。
而孔掃描通過測量多個點的吸光度,將聚集體的影響分布在更寬的表面積上,從而消除數(shù)據(jù)波動并提高整體測量的準確性。
孔掃描對大腸桿菌生長曲線數(shù)據(jù)變異性的影響。
BMG的Micro-GCM微生物生長曲線監(jiān)測系統(tǒng)提供從100-1100rpm連續(xù)可調(diào)的振蕩頻率,幫助科研人員精細的選擇最優(yōu)化適合不同微生物樣本的振蕩頻率。Micro-GCM還具有雙圓周振蕩模式,能更有效地混合微生物懸浮液。同時,Micro-GCM還具有孔內(nèi)多點掃描的讀數(shù)方法,以減小數(shù)據(jù)的CV,因而幫助科研人員得到完美的微生物生長曲線數(shù)據(jù),獲得更準確和可重現(xiàn)的 OD600結(jié)果。
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