熒光染料CFSE(CFDA-SE),是一種可對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記的新型染料,可以標(biāo)記活體細(xì)胞。其基本原理如下:CFSE能夠輕易穿透細(xì)胞膜,在活細(xì)胞內(nèi)與胞內(nèi)蛋白共價(jià)結(jié)合,水解后釋放出綠色熒光。在細(xì)胞分裂增殖過(guò)程中,它的熒光強(qiáng)度會(huì)隨著細(xì)胞的分裂而逐級(jí)遞減,標(biāo)記熒光可平均分配至兩個(gè)子代細(xì)胞中,因此其熒光強(qiáng)度是親代細(xì)胞的一半,根據(jù)這一特性,它可被用于檢測(cè)細(xì)胞增殖,細(xì)胞周期的估算及細(xì)胞分裂等方面。
材料與方法
1.試劑
2.樣品制備
數(shù)據(jù)分析
在FSC/SSC上圈出淋巴細(xì)胞,使用FSC-W/FSC-A排除黏連體,CFSE/CD19圖中圈出CD19陽(yáng)性細(xì)胞,使用CFSE單參分別看淋巴細(xì)胞與CD19陽(yáng)性(B細(xì)胞)的增殖情況。
結(jié)果
對(duì)照組:
實(shí)驗(yàn)組:
結(jié)果顯示,經(jīng)過(guò)CpG 刺激3 天后的CD19 陽(yáng)性細(xì)胞增殖效率比對(duì)照組有明顯的提升(23.44%:18,70%)。
CytoFLEX 能明顯的區(qū)分淋巴細(xì)胞增殖的不同代數(shù),從圖中看至少有明顯的5 代細(xì)胞,而且CD19 陰陽(yáng)性區(qū)分也十分明顯,體現(xiàn)出了出眾的儀器靈敏度與分辨率。