gelred一種高靈敏、低毒性和超穩(wěn)定于一身的極佳的熒光核酸凝膠染色試劑。具有廣泛適應(yīng)性和染色過程簡單等特點。下面簡單介紹gelred使用方法
1.膠染法(用法同EB)
(1)制膠時加入GelRed 核酸染料(例如:每50mL 瓊脂糖溶液中加入5μL GelRed 10,000× 儲液,以此比例類推)。
(2)按照常規(guī)方法進行電泳。
注意事項:
此方法染色染料用量相對較少。500 μL染料大約可以做100塊50mL的膠。
由于GelRed具有良好的熱穩(wěn)定性,可以在熱的瓊脂糖溶液中直接添加,而不需要等待溶液冷卻。搖晃,振蕩或者翻轉(zhuǎn)以保證染料充分混勻。也可以選擇將GelRed儲液加到瓊脂糖粉末和電泳緩沖液中,然后用微波爐或其他常用方式加熱以制備瓊脂糖凝膠。GelRed兼容所有常用的電泳緩沖溶液。
含有染料的預(yù)制凝膠溶液可以大量制備,并長期保存直到使用。
此方法不適合預(yù)制聚凝膠,對于聚凝膠請使用泡染法。
2.泡染法
(1)按照常規(guī)方法進行電泳。
(2)用H2O將GelRed 10,000× 儲液稀釋約3,300倍到0.1M NaCl中,制成3× 染色液。(例如將15μL GelRed 10,000× 儲液和5mL 1M NaCl加到45mL H2O中)。
(3)將凝膠小心地放入合適的容器中,如聚丙烯容器中。緩慢加入足量的3× 染色液浸沒凝膠。室溫振蕩染色30min左右,最佳染色時間根據(jù)凝膠厚度以及瓊脂糖濃度不同而略有不同。對于含3.5~10%的凝膠,染色時間通常介于30min到1h,并隨含量增加而延長。
注意事項:
用泡染法染色時,染料用量較多。單次使用的染色液可重復(fù)使用3次左右。
3× GelRed染色液可以大量制備,在室溫下避光保存直至用完。