隨著光吸收法可以滿足越來越多的應(yīng)用檢測(cè)領(lǐng)域，終點(diǎn)法讀板機(jī)在實(shí)驗(yàn)室中的占有率也越來越高。例如ELISAs方法進(jìn)行細(xì)胞因子定量和Bradford法進(jìn)行蛋白定量。本篇應(yīng)用就是要著重比較使用Bradford法進(jìn)行蛋白定量檢測(cè)時(shí)，Molecular Devices公司最新的產(chǎn)品EMax® Plus微孔板讀板機(jī)和VMax微孔板讀板機(jī)的性能。此外，我們比較了EmaxPlus微孔板讀板機(jī)和Emax終點(diǎn)法微孔板讀板機(jī)，利用雙抗夾心ELISA方法來定量小鼠/大鼠IL-22細(xì)胞因子時(shí)表現(xiàn)上的差異。

 

Bradford蛋白定量檢測(cè)法是一種基于酸性染料與蛋白結(jié)合的光吸收實(shí)驗(yàn)1。當(dāng)考馬斯亮藍(lán)染料與蛋白質(zhì)結(jié)合后，其光吸收最大檢測(cè)波峰是從460nm轉(zhuǎn)移至595nm2�？梢酝ㄟ^擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線得出未知樣本的濃度。

使用伯樂公司的Bradford蛋白定量檢測(cè)試劑盒。以牛血清白蛋白標(biāo)品來制作一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，加入96孔板中且每個(gè)濃度下有三個(gè)復(fù)孔。將考馬斯亮藍(lán)G-250染料按1:4稀釋后加入到蛋白樣本中。孵育30分鐘后，分別在EMax Plus和VMax兩臺(tái)讀板機(jī)上檢測(cè)585nm波長下的吸光度。最后，應(yīng)用SoftMax® Pro軟件扣除背景后并生成一條標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖1)。通過比較發(fā)現(xiàn)兩臺(tái)讀板機(jī)上得出的R2結(jié)果都是0.98。曲線的線性部分也和試劑盒中對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的描述相同。

 

圖 1. 使用伯樂公司的Bradford蛋白定量檢測(cè)試劑盒中的牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)品制備一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。 兩臺(tái)儀器獲得的結(jié)果比較幾乎相同。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果線性區(qū)間可達(dá)5個(gè)稀釋度，且R2結(jié)果均為0.98。

 

白介素22是一種和炎癥相關(guān)的細(xì)胞因子。它是白介素10細(xì)胞因子超家族和干擾素3家族的一員，在介導(dǎo)炎癥反應(yīng)和組織修復(fù)過程中起到重要的作用。IL-22可表達(dá)在多種細(xì)胞中，如gut，skin，NK細(xì)胞and CD4+Th1細(xì)胞4。

使用R&D公司小鼠/大鼠IL-22雙抗夾心法E L I S A 檢測(cè)試劑盒進(jìn)行定量，比較EMax Plus和EMax兩臺(tái)讀板機(jī)的檢測(cè)結(jié)果。首先，將一種能特異性結(jié)合小鼠/大鼠IL-22的多克隆抗體預(yù)先包被在一塊96孔板中。然后，使用移液器向微孔板中加入標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控和空白對(duì)照進(jìn)行孵育，推薦使用Molecular Devices公司的最新洗板機(jī)MultiWash.+進(jìn)行洗板。隨后，包被有多抗的微孔板中加入小鼠/大鼠IL-22細(xì)胞因子進(jìn)行孵育后再洗板。最后，短暫孵育后加入底物終止反應(yīng)并在EMax Plus和EMax兩臺(tái)讀板機(jī)上進(jìn)行讀數(shù)。顏色深淺與孵育時(shí)結(jié)合的小鼠／大鼠IL-22量成正比。應(yīng)用SoftMax Pro軟件計(jì)算后生成標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖2)。兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線的R2值也很接近。

 

圖2. 使用R&D公司的小鼠/大鼠IL-22 ELISA定量檢測(cè)試劑盒，比較EMax Plus和EMax兩臺(tái)讀板機(jī)在光吸法檢測(cè)結(jié)果上的差異。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備及雙抗夾心ELISA實(shí)驗(yàn)過程都使用了MultiWash+洗板機(jī)單列清洗模式。發(fā)現(xiàn)在兩臺(tái)讀板機(jī)上的ELISA檢測(cè)結(jié)果，即兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線幾乎相同。

 

 

關(guān)于MultiWash+洗板機(jī)

MultiWash+是一臺(tái)全自動(dòng)洗板機(jī)，兼容96孔和384孔板。并且標(biāo)配有四個(gè)洗液瓶或沖洗瓶，外加一個(gè)廢液瓶，實(shí)現(xiàn)清洗的最大靈活性。儀器上配有觸摸屏并且預(yù)存20種不同的清洗模式，每種模式下均可靈活的設(shè)置8個(gè)循環(huán)步驟。另外，儀器還可調(diào)節(jié)洗液流速和體積，調(diào)節(jié)吸液的速度和時(shí)間及浸泡時(shí)間。同時(shí)，洗頭通過在每個(gè)孔中交叉吸液方式提高清洗效率，降低每孔中的殘液量，并提供三種震蕩方式方便用戶混勻洗液。儀器占地面積小，無需額外的真空和壓力裝置，內(nèi)置泵的設(shè)計(jì)為您提供一個(gè)安靜的操作環(huán)境。