Percepta在針對550位北美和歐洲的頂級生物醫(yī)藥研究人員的報告中顯示，基于電化學(xué)發(fā)光技術(shù)的MSD ( Meso Scale Discovery ) 是最受歡迎的5大免疫分析品牌之一。MSD電化學(xué)發(fā)光技術(shù) 與傳統(tǒng)酶聯(lián)免疫分析ELISA優(yōu)勢對比如下:

 

1.更高靈敏度與更寬的線性范圍

 

傳統(tǒng)酶聯(lián)免疫分析ELISA主要基于酶標儀，酶標儀的靈敏度往往在10-1pg/ml。 MSD電化學(xué)發(fā)光技術(shù)主要基于超敏多因子電化學(xué)發(fā)光分析儀MESO Sector 600或Quickplex SQ 120。MSD靈敏度可達0.05pg/ml，有效線性范圍達6 log。

 

傳統(tǒng)ELISA常規(guī)線性范圍在10pg/ml-1000pg/ml，采用Ultra-sensitivity試劑盒則為0.5-10pg/ml。 對于一個生物學(xué)實驗，往往要兼顧正常對照組與疾病組的樣本，樣本中的待測蛋白濃度分布一般從零點幾個pg到幾千pg不等，所以一個ELISA試劑盒的線性范圍不能同時兼顧高低豐度蛋白的檢測，需要非常多的預(yù)實驗進行稀釋度摸索，費時費力。 而MSD提供了從亞皮克級到幾萬皮克濃度的寬線性范圍，有效將所有樣本落在最佳線性范圍內(nèi)，得到準確測定（見下圖比對，紅色條狀為疾病樣本，黃色條狀為正常參照組）。 同時MSD的靈敏度可達0.05pg/ml，對于目前有些疾病樣本中待測蛋白濃度下調(diào)的研究項目來說，更能夠有效的發(fā)現(xiàn)疾病組與正常對照組的差異，實現(xiàn)新的科學(xué)發(fā)現(xiàn)。

 

 

2.節(jié)省樣本用量，可實現(xiàn)多重檢測

 

傳統(tǒng)ELISA所需樣本量一般為50-100ul，如果同時關(guān)注10個細胞因子的表達調(diào)控則可能需要多達500-1000ul的樣本，對于很多ELISA實驗來說樣本量就成了關(guān)鍵問題。

 

MSD通過點陣技術(shù)，在96孔石墨電極板里可實現(xiàn)10個指標每孔的檢測。也可在24孔板里定制實現(xiàn)100指標/孔的篩選檢測。滿足了不同的實驗需求。在樣本用量上，無論單指標或多指標都只需≤25ul的樣本，即可完成檢測。為珍稀樣本的研究提供了更多的數(shù)據(jù)。

 

目前MSD可以在100ul的極其珍貴的腦脊液樣本中，復(fù)孔定量測定40種Biomarker，這是以往技術(shù)都所不能實現(xiàn)的。

            

 

                 

 

MSD 板內(nèi)CV<6-8%,板間<10%,批間<15%。同時MSD試劑盒有效期長達30個月，為長時間研究項目，提供了使用同一批號試劑的可能性。

 

 

MSD平臺由于其獨特的電化學(xué)發(fā)光原理，可將許多非特異信號予以排除，所以受樣本性質(zhì)的影響就更�。ㄈ缯吵順颖�，懸濁顆粒樣本等），因此對于各類生物學(xué)樣本的兼容度更高。

 

目前MSD平臺上測定樣本總類主要包括：血清，血漿，培養(yǎng)上清，細胞/組織裂解液，腦脊液，尿液，關(guān)節(jié)滑液，唾液，痰液，糞便提取液，眼睛房水，各類灌洗液等基本所有的生物學(xué)樣本。對于最簡單的血漿樣本來說，MSD也可兼容不同抗凝劑的血漿樣本。大大降低了實驗所需樣本收集上的難度。

 

此外基質(zhì)效應(yīng)會影響到實驗準確性與靈敏度，MSD是目前唯一一個被國外科學(xué)家廣泛認可的基本無基質(zhì)效應(yīng)的免疫分析平臺。

 

請參見: Immunol Res;DOI 10.1007/s12026-014-8491-6; T.Maecker

  

 

MSD提供了比ELISA更為便捷快速的實驗流程，將加樣等手動操作時間縮短至45分鐘以內(nèi)，并為培養(yǎng)上清等高豐度樣本快速檢測，提供了只需2.5小時的一步法流程，解放了勞動力，提高了科研效率。同時在MSD平臺上由于特有的電化學(xué)發(fā)光技術(shù)，可有效控制背景信號，可以實現(xiàn)免洗的實驗流程。請見下圖MSD流程以及實驗時間比較：

 

一步法流程：

超敏實驗流程：

實驗流程時間比對：

 

 

ELISA在顯色時，需要避光來保證信號穩(wěn)定。同時，由于底物與終止液加入有先后時間差異，會不可避免的產(chǎn)生因顯色時間不一致導(dǎo)致的數(shù)據(jù)差異。

 

MSD由于基于電化學(xué)發(fā)光技術(shù)，信號分子SULFO-TAG需在電激發(fā)的情況下才能產(chǎn)生信號，因此整個實驗流程無需避光，不受實驗操作人員技術(shù)水平差異的影響。此外，在實驗完成加入所有液體后，并不會被激發(fā)出任何信號。只有送入儀器，通過電極電激發(fā)后方才產(chǎn)生信號，每孔激發(fā)與信號采集時長統(tǒng)一，避免了像ELISA底物與終止液加入順序先后所導(dǎo)致的數(shù)據(jù)差異，數(shù)據(jù)穩(wěn)定度極高。 請見下圖電化學(xué)發(fā)光平臺示意圖：

 

MSD平臺所用的石墨電極板，為高分子聚合材料，表面與內(nèi)部具有3D結(jié)構(gòu)，能夠提高有效載量至傳統(tǒng)的ELISA板的10-100倍。因此在板底可以固定蛋白、小肽、多糖、核酸、病毒顆粒、細胞膜、活細胞等，實現(xiàn)不同的實驗檢測方案。

 

板底3D結(jié)構(gòu)示意圖

 

多元化實驗方案

 

同時，由于載量不同以及表面親疏水修飾的不同，MSD板在包被方案上可以使用傳統(tǒng)方法的Solution Coat，也可以采用Dot Coat的方法，將2-5ul蛋白點在板底中央進行包被。蛋白用量只需要Solution Coat的1/10-1/5，且包被時間僅僅需要一個小時，省時省力。

 

 

9. 部分檢測指標如下：

 

多因子檢測組合	檢測指標
Human Biomarker 40-Plex Kit (1 Plate) V-PLEX™	bFGF, CRP, Eotaxin, Eotaxin-3, Flt-1, GM-CSF, ICAM-1, IFN-γ, IL-1α, IL-1β, IL-10, IL-12 p70, IL-12/IL-23p40, IL-13, IL-15, IL-16, IL-17A, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-8 (HA), IP-10, MCP-1, MCP-4, MDC, MIP-1α, MIP-1β, PlGF, SAA, TARC, Tie-2, TNF-α, TNF-β, VCAM-1, VEGF, VEGF-C, VEGF-D
Neuroinflammation Panel 1 (hu) Kit (1 Plate) V-PLEX™	bFGF, CRP, Eotaxin, Eotaxin-3, Flt-1, ICAM-1, IFN-γ, IL-1α, IL-1β, IL-10, IL-12/IL-23p40, IL-13, IL-15, IL-16, IL-17A, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IP-10, MCP-1, MCP-4, MDC, MIP-1α, MIP-1β, PlGF, SAA, TARC, Tie-2, TNF-α, TNF-β, VCAM-1, VEGF, VEGF-C, VEGF-D
Human Cytokine 30-Plex Kit (1 Plate) V-PLEX™	Eotaxin, Eotaxin-3, GM-CSF, IFN-γ, IL-1α, IL-1β, IL-10, IL-12 p70, IL-12/IL-23p40, IL-13, IL-15, IL-16, IL-17A, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-8 (HA), IP-10, MCP-1, MCP-4, MDC, MIP-1α, MIP-1β, TARC, TNF-α, TNF-β, VEGF
NHP Cytokine 24-Plex Kit (1 Plate) V-PLEX™	Eotaxin-3, GM-CSF, IFN-γ, IL-1β, IL-10, IL-12/IL-23p40, IL-15, IL-16, IL-17A, IL-2, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-8 (HA), IP-10, MCP-1, MCP-4, MDC, MIP-1α, MIP-1β, TARC, TNF-β, VEGF
Proinflammatory Panel 1 (rat) Kit (1 Plate) V-PLEX™	IFN-γ, IL-1β, IL-10, IL-13, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, KC/GRO, TNF-α
Chemokine Panel 1 (human) Kit (1 Plate) V-PLEX™	Eotaxin, Eotaxin-3, IL-8 (HA), IP-10, MCP-1, MCP-4, MDC, MIP-1α, MIP-1β, TARC
Proinflammatory Panel1 (mouse) Kit (1 Plate) V-PLEX™	IFN-γ, IL-1β, IL-10, IL-12 p70, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, KC/GRO, TNF-α
Proinflammatory Panel1 (human) Kit (1 Plate) V-PLEX™	IFN-γ, IL-1β, IL-10, IL-12 p70, IL-13, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, TNF-α
Cytokine Panel 1 (human) Kit (1 Plate) V-PLEX™	GM-CSF, IL-1α, IL-12/IL-23p40, IL-15, IL-16, IL-17A, IL-5, IL-7, TNF-β, VEGF
Human Proinflammatory Panel I (4-Plex) (1 Plate) V-PLEX™	IFN-γ, IL-1β, IL-6, TNF-α
Human Proinflammatory Panel II (4-Plex) (1 Plate) V-PLEX™	IL-1β, IL-6, IL-8, TNF-α
Chemokine Panel 1 (NHP) Kit (1 Plate) V-PLEX™	Eotaxin-3, IL-8 (HA), IP-10, MCP-1, MCP-4, MDC, MIP-1α, MIP-1β, TARC
Chemokine Panel 1 (NHP) Kit (1 Plate) V-PLEX™ Plus	Eotaxin-3, IL-8 (HA), IP-10, MCP-1, MCP-4, MDC, MIP-1α, MIP-1β, TARC
Proinflammatory Panel 1 (NHP) Kit (1 Plate) V-PLEX™	IFN-γ, IL-1β, IL-10, IL-2, IL-6, IL-8
Cytokine Panel 1 (NHP) Kit (1 Plate) V-PLEX™	GM-CSF, IL-12/IL-23p40, IL-15, IL-16, IL-17A, IL-5, IL-7, TNF-β, VEGF
Angiogenesis Panel 1 (human) Kit (1 Plate) V-PLEX™	bFGF, Flt-1, PlGF, Tie-2, VEGF, VEGF-C, VEGF-D
Vascular Injury Panel 2(human) Kit (1 Plate) V-PLEX™	CRP, ICAM-1, SAA, VCAM-1
Ab Peptide Panel 1 (4G8) Kit (1 Plate) V-PLEX™	Abeta 38, Abeta 40, Abeta 42
Ab Peptide Panel 1 (6E10) Kit (1 Plate) V-PLEX™	Abeta 38, Abeta 40, Abeta 42

 

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