用合成的具有抗體表位的多肽，對(duì)篩選到的前146生長(zhǎng)速率的克隆進(jìn)行抗原特異性分析。多肽和抗體顯示了很強(qiáng)的的親和性，完全符合前期研究的闡釋?zhuān)�因此，合成的多肽用�?lái)篩選新的，具有高抗體親和性的亞克隆。

 

生物素標(biāo)記的多肽加載在含鏈霉素的微孔板表面，再加146個(gè)沒(méi)有稀釋的雜交瘤細(xì)胞上清液，測(cè)定IgG的結(jié)合能力。從中選取了前7個(gè)顯示了最優(yōu)結(jié)合力的特殊亞克隆。

 

7個(gè)高價(jià)值特異的亞克隆在液體培養(yǎng)基規(guī)模化生產(chǎn)。這些克隆被擴(kuò)增，一旦獲得足夠的培養(yǎng)基體積，5個(gè)亞克隆被冷凍用于將來(lái)的研究參考。而剩下的2個(gè)高親和/高IgG分泌克隆繼續(xù)擴(kuò)增2-3周，直到完成中試生產(chǎn)（1升）。

 

為了識(shí)別用于發(fā)展高級(jí)診斷的雙鏈DNA病毒特異抗體的亞克隆，ClonePix技術(shù)篩選480FITC陽(yáng)性的雜交瘤克隆，基于半固體培養(yǎng)基技術(shù)和FITC標(biāo)記的CloneDetect試劑。CloneSelect Imager 識(shí)別了其中146個(gè)快速生產(chǎn)的克隆，7個(gè)高產(chǎn)量的克隆被確認(rèn)和目標(biāo)多肽具有高度的特異性。選擇其中的2個(gè)亞克隆進(jìn)行中試生產(chǎn)和剩余的5個(gè)作為細(xì)胞銀行。這個(gè)流程降低了雜交瘤細(xì)胞的篩選時(shí)間，最多為常規(guī)有限稀釋法篩選時(shí)間的50%，而且篩選了強(qiáng)健的目標(biāo)克隆細(xì)胞作為其他附加的研究和生產(chǎn)。

 

ClonePix系統(tǒng)再克隆和特異性確認(rèn)之后，2個(gè)亞克隆擴(kuò)增，重新種到具有CloneDetect試劑的半固體培養(yǎng)基的6孔板中。ClonePix系統(tǒng)成像和分析表明克隆正常的分泌了IgG，同時(shí)，通過(guò)均相均一化過(guò)程，能觀察到高產(chǎn)IgG的克�。▓D5）。

 

利用ClonePix技術(shù)重新篩選低產(chǎn)量的親本克隆。高產(chǎn)、穩(wěn)定的亞克隆被挽回。Protein G純化單克隆抗體，定量總產(chǎn)量。相比親本克隆的歷史產(chǎn)量（~1mg/L），新的亞克隆細(xì)胞IgG的產(chǎn)量明顯地增加（17-25mg/L），圖6顯示。