1. 去除老鼠頭皮,清潔頭蓋骨。在頭蓋骨上面選定的位置(參看定位儀圖譜)打小洞(用精密高速鉆機MF5360,環(huán)型鉆頭MF5176----這個孔洞用于放探針底座),這個小洞需要打穿頭蓋骨。環(huán)型鉆頭的特點是鉆屑少。
2. 在這個孔洞的附近打2-3個孔(使用鉆頭MF5362),用于安裝螺絲MF5182,目的是增加探針底座的與頭蓋骨的粘合力,使探針底座不容易脫落。
3. 重要的是:需要精確選準探針埋置的部位,才能夠得到最多的微透析樣品。使用立體定位儀MD3000,把探針底座(MD2251或者MD2250)埋入上面的孔洞里面。用粘和劑MD1300固定探針底座和螺絲。
4. 使用立體定位儀MD3000把探針(例如MD2200)插入探針底座。
5. 根據(jù)實驗需要,選擇推進控制器(MD1000或者MD1020)的流速。把推進控制器上面的連接扁線插入微量推進器MD1001的插孔。
6. 在注射器(例如MDN0100)中灌入實驗需要的液體,放在微量推進器上面。在這個微量推進器上面,只可以放1個注射器。如果需要在1個微量推進器上面放2—3個注射器,可以購買注射器架子MD1002 ,在MD1002上面可以放2—3個注射器。
7. 把已經(jīng)埋置探針的老鼠放入清醒系統(tǒng)MD1404的籠子內(nèi)。在老鼠身體上面放項圈MF5371,把清醒系統(tǒng)里面的鉤子,鉤住MF5371,所以,當(dāng)老鼠走動的時候,這個鉤子也轉(zhuǎn)動,同時,上面的光電傳感器向儀器發(fā)出老鼠走動的信號,儀器就會使清醒系統(tǒng)的底盤轉(zhuǎn)動,當(dāng)然,這個轉(zhuǎn)動是與老鼠走動的方向相反,得到最最重要的結(jié)果----使老鼠身體上面的2個管子(輸液管子和透析液管子)不會纏繞、堵塞,使2個管子里面的液體流動暢通。
8. 用管子MF5164與接頭MD1510連接注射器----探針,探針的另外1個接口用管子和接頭連接到恒溫冷凍收集器MD1201等。
9. 檢查各種連接無誤。
10. 開通清醒系統(tǒng)MD1404電源。
11. 在恒溫冷凍收集器MD1201里面放置收集管,開通恒溫冷凍收集器電源,設(shè)置恒溫冷凍收集器5個參數(shù)。
12. 開通推進控制器電源,微透析儀器開始工作。
建議
微透析實驗與許多實驗不同,很多方面取決于操作者的技能水平。
1. 埋置探針的部位要準確。埋置探針的深度也要準確。選擇探針的膜的長度需要合適。目的是得到最多的微透析樣品。
2. 操作探針需要細心,需要避免探針的膜的損壞,從而延長探針的壽命和使用次數(shù)。
3. 探針使用前的處理。以及在使用間隔時候的處理,沖洗,浸泡..,目的也是延長探針的壽命和使用次數(shù)。
4. 在連接注射器、探針、液體選擇開關(guān)、恒溫冷凍收集儀,等等系統(tǒng)的時候,需要細心,連接管、接頭,與上述物件,套/插 時候,一方面,需要防止漏液和堵塞,另一方面,也要防止連接管和接頭的損壞。
5. 探針,連接管,接頭,是消耗品,細心、正確的操作方法,能夠延長它的使用壽命和次數(shù)。
6. 灌流液體的配制,流速的選擇。恒溫冷凍收集儀的參數(shù)(延時時間、收集時間等)選擇。等等,都需要學(xué)習(xí)和自己經(jīng)驗的積累總結(jié)。尤其是埋置探針,是得到微透析液體量多質(zhì)優(yōu)的重要步驟,操作者的手法非常重要。
要使實驗成功,操作者的技能水平的重要性,比儀器本身還要重要。優(yōu)秀的操作者,容易得到微透析液,量多質(zhì)好,消耗品(探針、連接管、接頭)的使用壽命長、次數(shù)多。
小提示:當(dāng)微量推進器工作時,由于流速很慢,幾分鐘才推出一滴液體,人眼根本看不出微量推進器是否在工作,所以有時候操作人員在心理上會擔(dān)心微量推進器沒有工作。有個簡單的方法:在微量推進器一端的黑色圓柱上沾上一個小白點(白膠帶或者白粘紙),當(dāng)微量推進器工作時,黑色圓柱會很慢速地轉(zhuǎn)動,小白點會改變位置,說明微量推進器工作正常,打消了心理顧慮。