摘要:目的 　 觀察氯胺酮對(duì)小鼠避暗潛伏期及錯(cuò)誤次數(shù)的影響 ,并初步探討其機(jī)制。方法 　 按分層隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)將小鼠分為6組( n=10) :生理鹽水組(NS組) ,一葉秋堿(1 mg· kg- 1)組(S組) ,氯胺酮(5 mg· kg-1、10 mg·kg- 1、20 mg·kg-1)組(K5、K10、K20組) ,一葉秋堿(1 mg· kg- 1) +氯胺酮(20 mg· kg- 1)組(SK組) 。用避暗實(shí)驗(yàn)測(cè)定給藥后24 h小鼠的避暗潛伏期及錯(cuò)誤次數(shù)。

結(jié)果 　 與NS組相比 ,K10、K20組的避暗潛伏期縮短( P均<0.01)、錯(cuò)誤次數(shù)增多(P<0.05, P< 0.01) ,似呈劑量依賴性。與 K20組相比 ,SK組的避暗潛伏期延長(zhǎng)( P < 0. 01) 、錯(cuò)誤次數(shù)減少( P < 0. 01) ,但不能恢復(fù)至NS組水平( P < 0. 01 , P < 0. 05) 。

結(jié)論 　GABAA 受體部分介導(dǎo)了氯胺酮對(duì)小鼠的記憶損害作用。

關(guān)鍵詞:氯胺酮;小鼠;記憶;避暗實(shí)驗(yàn)

氯胺酮(ketamine,K)是臨床常用的靜脈麻醉·藥,具有明顯的鎮(zhèn)痛作用[1-2],在術(shù)中及術(shù)后鎮(zhèn)痛中應(yīng)用比較廣泛。近年研究發(fā)現(xiàn) ,氯胺酮對(duì)認(rèn)知功能亦有影響[3],但是其作用機(jī)制尚不清楚。本研究利用避暗實(shí)驗(yàn) ,并通過(guò)預(yù)先皮下注射 GABAA 受體的特異性阻斷藥一葉秋堿(securinine,S)[4],觀察不同劑量氯胺酮對(duì)小鼠記憶的影響,探討氯胺酮是否通過(guò)GABAA受體而影響記憶。

1 　材料和方法

1. 1 　實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 　KM 小鼠(清潔級(jí) ,徐州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供 ,合格證號(hào) SYXK(蘇) 2002 - 0038) , 體重22～25 g ,自由攝食飲水。實(shí)驗(yàn)前3天使小鼠熟悉實(shí)驗(yàn)室環(huán)境 ,每日 9 :00～15 :00 在隔音的環(huán)境中進(jìn)行避暗實(shí)驗(yàn)。

1. 2 　藥物 　鹽酸氯胺酮注射液,硝酸一葉秋堿注射液,均以生理鹽水(NS)稀釋至所需濃度。

1. 3 　實(shí)驗(yàn)儀器 　小鼠避暗儀。

1. 4 　動(dòng)物分組及處理 　按分層隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)將小鼠分組,使各組小鼠雌雄比例、平均體重基本相同。將小鼠分為6組:NS組、一葉秋堿(1 mg·kg-1)組(S組) 、不同劑量的氯胺酮 (5 mg·kg-1、10 mg·kg- 1、20 mg· kg-1)組( K5、K 10、K20組) 和一葉秋堿(1 mg·kg-1) +氯胺酮(20 mg·kg-1)組(SK組) ,每組均為10只。在訓(xùn)練前 10 min ,S 組、SK組皮下注射一葉秋堿。訓(xùn)練前5 min ,各組分別皮下注射生理鹽水或氯胺酮。所有的藥物和NS均按照 10 ml·kg-1的劑量給予。

1. 5 　避暗實(shí)驗(yàn) 　 避暗實(shí)驗(yàn)參照文獻(xiàn)[5]。實(shí)驗(yàn)裝置分為明暗兩室,兩室之間有一直徑為3cm大小的圓洞,暗室底部銅柵接電。訓(xùn)練時(shí)先將小鼠放入反應(yīng)箱中適應(yīng)3min ,然后暗室底部銅柵通40V、50Hz交流電。將小鼠背對(duì)洞口放入明室,小鼠進(jìn)入暗室則受到電擊。訓(xùn)練時(shí)避暗潛伏期大于180s者棄去不用。24 h后再次將小鼠放入明室,記錄5min內(nèi)第一次進(jìn)入暗室的時(shí)間(潛伏期)和進(jìn)入次數(shù)(錯(cuò)誤次數(shù))。如果5min時(shí)小鼠仍未進(jìn)入暗室,錯(cuò)誤次數(shù)記為0次,潛伏期記為300s。

1. 6 　統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 　所有的數(shù)據(jù)均以x ±s 表示,用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理 ,方差分析進(jìn)行顯著性差異檢驗(yàn) ,兩兩比較用LSD檢驗(yàn) , P < 0. 05為有顯著性差異。

2 　結(jié) 　果

　　與NS組相比:K5組錯(cuò)誤次數(shù)略增多、潛伏期略縮短 ,差異無(wú)顯著性( P >0.05) ; K10、K20組的錯(cuò)誤次數(shù)明顯增多(P< 0.05 , P<0.01) ,避暗潛伏期縮短( P均<0.01) ,似呈劑量依賴性。與K20組相比:SK組的錯(cuò)誤次數(shù)明顯減少(P<0.01) 、避暗潛伏期明顯延長(zhǎng)( P<0.01) ,有顯著性差異 ,但不能恢復(fù)至NS組水平( P< 0.05 , P < 0.01) 。

3 　討 　論

　　全身麻醉期間可能發(fā)生術(shù)中知曉 ,曾有報(bào)道 , 56. 3 %的創(chuàng)傷后情緒紊亂癥患者曾經(jīng)有過(guò)術(shù)中知曉的經(jīng)歷[6],若手術(shù)中不當(dāng)?shù)恼勗捇蛱弁创碳さ却媪粲谟洃浿?,則可能對(duì)其以后的精神行為或術(shù)后疼痛帶來(lái)負(fù)面影響[7],因此研究全身麻醉中的記憶是非常有意義的。γ-氨基丁酸(GABA)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)主要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì),對(duì)學(xué)習(xí)與記憶具有重要作用[8]。因此我們利用GABAA受體的特異阻斷藥一葉秋堿作為工具藥 ,來(lái)探討氯胺酮對(duì)記憶的影響及其與 GABAA 受體的關(guān)系。

　　人和動(dòng)物的心理活動(dòng)是無(wú)法直接觀察到的,只能根據(jù)觀察到的刺激反應(yīng)來(lái)推測(cè)腦內(nèi)發(fā)生的過(guò)程,對(duì)腦內(nèi)記憶過(guò)程的研究只能從人類或動(dòng)物學(xué)習(xí)或執(zhí)行某種任務(wù)后間隔一段時(shí)間,測(cè)定他們的操作成績(jī)或反應(yīng)時(shí)間來(lái)評(píng)價(jià)記憶效果。避暗實(shí)驗(yàn)是利用鼠類的嗜暗習(xí)性而設(shè)計(jì)的,是目前常用的測(cè)定鼠類記憶成績(jī)的方法之一,操作簡(jiǎn)單易行,動(dòng)物間的差異較小[5],因此我們本研究選擇了避暗實(shí)驗(yàn)。

　　在本實(shí)驗(yàn)中 ,單獨(dú)給予 GABAA 受體的特異性阻斷藥一葉秋堿(1mg· kg-1)后,與生理鹽水組相比,小鼠的錯(cuò)誤次數(shù)和避暗潛伏期均無(wú)顯著差異,說(shuō)明單獨(dú)應(yīng)用此劑量的一葉秋堿對(duì)小鼠的記憶并無(wú)明顯影響。單獨(dú)給予較大劑量的氯胺酮(10 mg·kg-1,20mg·kg-1) ,小鼠的避暗潛伏期明顯縮短、錯(cuò)誤次數(shù)明顯增加 ,并且似呈劑量依賴關(guān)系 ,說(shuō)明氯胺酮對(duì)小鼠的記憶有損害作用。而在給予氯胺酮(20 mg·kg-1)之前 ,預(yù)先用一葉秋堿(1 mg·kg-1)進(jìn)行處理 ,小鼠的錯(cuò)誤次數(shù)則較單獨(dú)應(yīng)用氯胺酮(20 mg· kg-1)明顯減少、避暗潛伏期明顯延長(zhǎng),但是未能恢復(fù)至生理鹽水組水平,說(shuō)明一葉秋堿可以部分逆轉(zhuǎn)氯胺酮對(duì)記憶的損害作用 ,提示 GABAA 受體介導(dǎo)了氯胺酮損害記憶的作用。至于氯胺酮對(duì)記憶的損害作用有無(wú)其他機(jī)制,尚待進(jìn)一步研究。