進(jìn)口內(nèi)參抗體——在WB實(shí)驗(yàn)中為什么需要使用內(nèi)參抗體？
| 進(jìn)口內(nèi)參抗體——在WB實(shí)驗(yàn)中為什么需要使用內(nèi)參抗體？ |
| 要檢測一個(gè)基因的表達(dá)產(chǎn)物是否正確，或者比較表達(dá)產(chǎn)物量的相對變化，首選方法是Western Blot。雖然，順利的時(shí)候Western Blot做起來很簡單，可不順的時(shí)候也很令人心煩――做不出結(jié)果啦、假陽性啦、結(jié)果出現(xiàn)多條帶啦、到底是一抗有問題還是二抗有問題啦……畢竟，作為一種有活性的生物大分子，抗體和抗原的反應(yīng)畢竟不象1+1那么明確，而用這種不確定的試劑來測定同樣知之甚少的表達(dá)產(chǎn)物，確實(shí)是有一定的不確定性的。所以，嚴(yán)謹(jǐn)?shù)腤estern Blot實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中要求有良好的參照體系，對實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析是非常有用的。 我們知道，要用Western Blot比較不同條件下或者不同組織中，目的蛋白表達(dá)量的相對多少，前提條件是等量的細(xì)胞上樣，才有比較的基礎(chǔ)。特別表達(dá)量不高時(shí)，上樣量的差別就很可能影響結(jié)果的分析。合星生物向您推薦使用內(nèi)參抗體來檢測您的實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，或者校準(zhǔn)您的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。內(nèi)參即是內(nèi)部參照（Internal Control），對于哺乳動物細(xì)胞表達(dá)來說一般是指由管家基因編碼表達(dá)的蛋白(Housekeeping Proteins)，它們在各組織和細(xì)胞中的表達(dá)相對恒定，在檢測蛋白的表達(dá)水平變化時(shí)常用它來做參照物。在Western Blotting中使用內(nèi)參其實(shí)就是在WB過程中的另外用內(nèi)參對應(yīng)的抗體檢測內(nèi)參，這樣在檢測目的產(chǎn)物的同時(shí)可以檢測內(nèi)參的表達(dá)，由于內(nèi)參在各組織和細(xì)胞中的表達(dá)相對恒定，借助檢測每個(gè)樣品內(nèi)參的量就可以用于校正上樣誤差，這樣半定量的結(jié)果才更為可信。此外使用內(nèi)參可以作為空白對照，檢測蛋白轉(zhuǎn)膜情況是否完全、整個(gè)Western Blot顯色或者發(fā)光體系是否正常。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析其實(shí)很簡單：如果樣品蛋白量有限，只夠進(jìn)行一次電泳轉(zhuǎn)膜實(shí)驗(yàn)時(shí)，分別檢測樣品的內(nèi)參量和目的蛋白量。將各樣品目的蛋白量分別除以其內(nèi)參含量，得到的數(shù)值即為內(nèi)參校正后的各樣品中目的蛋白相對含量，再用此數(shù)值進(jìn)行樣品間的比較和分析，得到目的蛋白含量在不同樣品間的實(shí)際變化結(jié)果。如果樣品量充分，可以先檢測內(nèi)參，觀測樣品間內(nèi)參顯色條帶是否一致，根據(jù)差異大小調(diào)整各樣品的上樣量重新進(jìn)行Western Blotting實(shí)驗(yàn)，至內(nèi)參量一致為止；若內(nèi)參一致，即可進(jìn)行不同樣品間目的蛋白表達(dá)變化分析。這樣雖然麻煩一點(diǎn)，但是可以保證結(jié)果更有說服力，更可信。畢竟我們的實(shí)驗(yàn)是一種嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ鳌?BR> 常用的蛋白質(zhì)內(nèi)參有GAPDH（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase）和細(xì)胞骨架蛋白beta-actin或beta-tubulin。最近的國外文獻(xiàn)報(bào)道中使用GAPDH內(nèi)參的較多。合星生物公司向您推薦進(jìn)口內(nèi)參抗體產(chǎn)品，我們能提供小鼠源、兔源等多種來源的上述內(nèi)參抗體，并且也能根據(jù)您的實(shí)驗(yàn)要求向您推薦不同的產(chǎn)品。與國產(chǎn)的內(nèi)參抗體相比，同樣是100ul，但是進(jìn)口內(nèi)參具有更高的稀釋比率和效價(jià)，因此具有更好的性價(jià)比。大大降低了內(nèi)參的費(fèi)用，性能穩(wěn)定、質(zhì)量可靠、易于保存。如果您對內(nèi)參抗體的產(chǎn)品或者選擇感興趣，請隨時(shí)與合星生物聯(lián)系。 |
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