MCE推出超900種一抗和多種二抗產(chǎn)品，涵蓋熱門靶點(diǎn)
官宣! 近期，MCE 迎來(lái)了一位新成員——抗體。抗體 (Antibodies) 是由抗原進(jìn)入機(jī)體，刺激 B 細(xì)胞增殖分化為漿細(xì)胞后合成并分泌的一類能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合并產(chǎn)生免疫效應(yīng)的球蛋白，又稱免疫球蛋白 (Immunoglobulin，Ig)。抗體重鏈 Fc 區(qū)域的特異性序列決定了 Ig 的類型，如 α-IgA、δ-IgD、ε-IgE、γ-IgG、μ-IgM。輕鏈則有兩種類型，分別為 λ 型和 κ 型 (圖 1)。
圖 1. 抗體結(jié)構(gòu) (左) 和檢測(cè)原理 (右) 示意圖
原理：抗體是一種特異性很高的蛋白質(zhì)，可以識(shí)別和結(jié)合到特定的抗原上，從而形成抗原-抗體復(fù)合物�？贵w檢測(cè)利用這種特異性反應(yīng)來(lái)檢測(cè)體內(nèi)是否存在特定的抗體。
一抗二抗？傻傻分不清楚
小 M 為大家鋪墊了抗體的基礎(chǔ)知識(shí)及原理，接下來(lái)作為萌新的你可能就要問(wèn)了，“抗體好像有兩個(gè)？”其實(shí)我們常說(shuō)的抗體指的是第一抗體，即能和抗原特異性結(jié)合的蛋白，種類包括單克隆抗體 (monoclonal antibody，mAb) 和多克隆抗體 (polyclonal antibody, pAb)。前者可識(shí)別抗原上的單個(gè)表位，而后者能夠特異性結(jié)合同一目標(biāo)抗原上的不同結(jié)合位點(diǎn) (圖 2)。
圖 2. mAb 和 pAb 示意圖
表 1. mAb 和 pAb 的主要區(qū)別
二抗是能和抗體結(jié)合，即抗體的抗體，其主要作用是檢測(cè)抗體的存在，放大一抗的信號(hào)。一抗可以特異地結(jié)合目標(biāo)蛋白，但通常需要發(fā)光物質(zhì)或者顯色基團(tuán)標(biāo)記才能被檢測(cè)出來(lái)，因此會(huì)使用可被檢測(cè)出的帶有標(biāo)記（如帶熒光、放射性、化學(xué)發(fā)光或顯色基團(tuán)）的二抗與一抗結(jié)合。這樣，當(dāng)一抗結(jié)合到底物上，就可以通過(guò)二抗檢測(cè)出來(lái)。
看到這里，可能又有小伙伴迷惑了：抗體選擇辣么多，而且各自都有看家本領(lǐng)，究竟誰(shuí)才能讓我的 paper 擠進(jìn)上層社交圈，受到 Science，Cell，Nature 等業(yè)內(nèi)大佬的賞識(shí)呢？別急別急，小 M 這有份秘籍，大家照著做，一定不會(huì)出錯(cuò)的。趕緊收藏~
抗體選擇之一抗
01
根據(jù)所做實(shí)驗(yàn)類型選擇抗體。
MCE 官網(wǎng)在產(chǎn)品頁(yè)信息 “應(yīng)用”一欄 列出了該抗體經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證后所適用的實(shí)驗(yàn)類型。
如，應(yīng)用：WB, ICC, IF, IHC-P, FC。02
分析樣本種屬
根據(jù)樣本種屬選擇抗體。
MCE 官網(wǎng)在產(chǎn)品頁(yè)信息 “反應(yīng)性”一欄列出了該抗體經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證后所適用的種屬信息。
如，反應(yīng)性：Human, Mouse, Rat。03
選擇抗體宿主物種
一般說(shuō)來(lái)，在使用偶聯(lián)二抗結(jié)合無(wú)偶聯(lián)物的一抗時(shí)，一抗宿主動(dòng)物的物種選擇較為重要。
① 為避免抗免疫球蛋白的二抗與樣品中的內(nèi)源性免疫球蛋白間發(fā)生交叉反應(yīng)，所選一抗的來(lái)源生物體應(yīng)與樣本中生物體不同。如，若研究小鼠蛋白，則應(yīng)選擇除小鼠外的生物體產(chǎn)生的一抗。假設(shè)選兔源的一抗，二抗則可選擇偶聯(lián)了檢測(cè)分子 (酶、熒光素、生物素等) 的抗兔 IgG。
② 如果選擇有偶聯(lián)物的一抗則不適用上述情況，除免疫組化外的其它對(duì)不含內(nèi)源性免疫球蛋白樣本的檢測(cè)方法，則抗體宿主物種的影響不大。
MCE 官網(wǎng)在產(chǎn)品頁(yè)信息“宿主”一欄列出了該抗體經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證后所適用的種屬信息。
如，宿主：Rabbit。
04
分析目的蛋白的結(jié)構(gòu)區(qū)域
① 待測(cè)樣本蛋白區(qū)域：確認(rèn)免疫原 (全長(zhǎng)蛋白、蛋白質(zhì)片段、多肽、整個(gè)生物體或細(xì)胞) 與待檢測(cè)蛋白區(qū)域一致或包含在其內(nèi)。
② 樣本的提取或處理過(guò)程：有些抗體要求樣品用特定方式處理，許多抗體僅能識(shí)別已還原和變性的蛋白質(zhì)(其可暴露出蛋白質(zhì)折疊形成的二級(jí)或三級(jí)結(jié)構(gòu)中被隱藏的表位)；另一方面，有些抗體僅能識(shí)別天然、折疊狀態(tài)的蛋白質(zhì)上的表位。抗體選擇之二抗
01
一抗的種屬來(lái)源
根據(jù)一抗的物種來(lái)源選擇相應(yīng)的抗該物種的二抗。
① 若一抗是鼠源的單克隆抗體，二抗則選抗小鼠的二抗 (山羊抗小鼠或兔抗小鼠等)。
② 在特殊實(shí)驗(yàn)中，如雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)，若一抗分別為兔源和鼠來(lái)源的，則相應(yīng)的二抗應(yīng)同時(shí)為抗兔和抗鼠，可選用驢來(lái)源的二抗。02
二抗的偶聯(lián)標(biāo)記
二抗的偶聯(lián)標(biāo)記類型主要有：
① 酶類標(biāo)記（如 AP、HRP…）② 熒光標(biāo)記（如 FITC、PE、Cy7…）
③ 其他標(biāo)記（如 Biotin…）
選用哪種探針的二抗主要取決于具體的實(shí)驗(yàn)。
如：Western blot 和 ELISA，常用的二抗是酶標(biāo)二抗；細(xì)胞或組織標(biāo)記實(shí)驗(yàn) (組織免疫化學(xué)，細(xì)胞免疫化學(xué)，流式細(xì)胞術(shù)) 中通常使用熒光基團(tuán)標(biāo)記的二抗，免疫組化中也可以使用辣根過(guò)氧化酶或堿性磷酸酶標(biāo)記的二抗。抗體選擇之內(nèi)參
選擇完抗體，還要好好思考，該怎么選擇內(nèi)參。切忌不管什么樣本，都千篇一律的選擇“GAPDH”或者“β-Actin”。此外，選擇內(nèi)參時(shí)，還需要根據(jù)內(nèi)參蛋白在樣本中相應(yīng)的表達(dá)量進(jìn)行選擇。給大家整理了一份內(nèi)參選擇的攻略，請(qǐng)及時(shí)收好哦~
表 2. 不同樣本中內(nèi)參選擇參照標(biāo)準(zhǔn)
1. β-Actin 不適用于心臟和骨骼肌的樣品，心肌和骨骼肌樣本可以用 α-Actin 做內(nèi)參；
2. 當(dāng)代謝信號(hào)通路受到影響，比如組織缺氧，糖尿病研究時(shí) GAPDH 不適合做內(nèi)參等；
3. 涉及細(xì)胞增殖時(shí) PCNA 不適合做內(nèi)參；
4. 涉及細(xì)胞凋亡時(shí) TBP、Lamin 等不適合做內(nèi)參;
5. Lamin B 不適合作為胚胎干細(xì)胞內(nèi)參。
抗體 “有話說(shuō)”
實(shí)驗(yàn)總有意外，那么會(huì)是什么原因?qū)е履?/span>？
1.你真的了解自己的蛋白嗎？
你的蛋白是否容易發(fā)生修飾？是否容易產(chǎn)生聚合體？是否存在同工異構(gòu)體？以及種屬來(lái)源都會(huì)影響蛋白的分子量。這里，小 M 給大家推薦 “UniProt” 網(wǎng)站，只有了解蛋白的“前世今生”，這世的我們才能 “雙向奔赴”，并“和平相處”呀。
2.你的樣本真的完全裂解了嗎？
這里，小 M 建議選擇合適的裂解液，如 RIPA Lysis Buffer (Strong) 并通過(guò)勻漿或超聲破碎的方式，充分使樣本裂解。
3.你真的選擇對(duì)的抗體嗎？
科研汪們，切記選擇已驗(yàn)證過(guò)并高特異性的抗體哦。這里，小 M 難免想要凡爾賽一番，小 M 提供的抗體都是具備嚴(yán)格，可控的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)哦。
4.你的實(shí)驗(yàn)操作真的無(wú)錯(cuò)可挑嗎？
這里，小 M 就實(shí)驗(yàn)操作給大家淺淺的提幾條建議：注意配膠時(shí)充分混勻，關(guān)注電泳的條件。
1）選擇合適的封閉液（HY-K1027），抗體稀釋液，洗膜液（HY-K1022，HY-K1025）等。
2）配膠過(guò)程中，注意膠的狀態(tài)。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)自己的目標(biāo)蛋白，選擇合適的電泳條件。
目前，MCE 提供 900+ 一抗和多種二抗，涵蓋熱門靶點(diǎn)，助力您的科研成果 “通萬(wàn)路”！快來(lái)看看咱家的明星產(chǎn)品 (因出場(chǎng)位置受限，只邀請(qǐng)了 6 位明星代表)：
PI3 Kinase p55 gamma Rabbit pAb
應(yīng)用：WB, IHC-P, ICC/IF反應(yīng)物種：Human, Mouse,
Rat
WB analysis of PI3 Kinase p55
gamma Rabbit pAb on different
lysates.
Lane 1-3:
HEK-293T, 3T3, C6 cell lysates.
應(yīng)用：WB, ICC/IF, IP
反應(yīng)物種：Human, Mouse, Rat
WB analysis of Chk1 Rabbit
pAb on different lysates.
Lane 1-3:
THP-1, C6, PC-12 cell lysates.
應(yīng)用：WB, IP, IHC-P
反應(yīng)物種：Human, Mouse, Rat
IHC-P analysis of paraffin-
embedded human lung cancer
tissue using HDAC4 (A5)
Mouse mAb
ATP Citrate Lyase (3D9) Mouse mAb
應(yīng)用：WB, ICC/IF, FC, IHC-P
反應(yīng)物種：Human, Mouse,
Monkey
IHC-P analysis of paraffin-
embedded mouse testis tissue
using ATP Citrate Lyase (D7)
Mouse mAb.
應(yīng)用：WB, ICC/IF
反應(yīng)物種：Human, Mouse, Rat
IF analysis of JNK1 (A3)
Mouse mAb in 3T3 cells
using JNK1 antibody.
Phospho-AMPK alpha 1 (Ser496) Rabbit pAb
應(yīng)用：WB, IHC-P, ICC/IF
反應(yīng)物種：Human, Mouse, Rat
IF analysis of Phospho-AMPK
alpha 1 (Ser496) Rabbit pAb
in Hela cells using AMPK
alpha 1 (Phospho-Ser487)
antibody.
小結(jié)
好啦，我的新朋友就介紹到這里啦！最后的最后，小 M 衷心祝福使用 MCE 抗體產(chǎn)品的科學(xué)汪都有機(jī)會(huì)得到 Science，Cell，Nature 等業(yè)內(nèi)大佬的賞識(shí)，咱們下期再會(huì)哦！
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相關(guān)產(chǎn)品 |
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Phospho-AKT1 (Ser473) Rabbit MAb 可檢測(cè) AKT1 在絲氨酸 473 位點(diǎn)的磷酸化。AKT1 圍繞 S473 區(qū)域與 AKT2 和AKT3 中的相應(yīng)區(qū)域具有高度相似性，因此如果在相應(yīng)的絲氨酸上磷酸化，可能會(huì)與這些蛋白質(zhì)發(fā)生交叉反應(yīng)。 |
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可檢測(cè) alpha-tubulin 總蛋白的內(nèi)源水平，并不會(huì)與重組 β-tubulin 蛋白發(fā)生交叉反應(yīng)。 |
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可檢測(cè) Bcl-2 總蛋白的內(nèi)源水平。 |
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可識(shí)別 Caspase-11 總蛋白的內(nèi)源水平。 |
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可檢測(cè)由 caspase 裂解產(chǎn)生的 PARP1 大片段 (89 kDa) 的內(nèi)源水平。該抗體不識(shí)別全長(zhǎng) PARP1 或其他 PARP 同工型。 |
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HRP-conjugated AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) 在最佳條件下，將抗兔 IgG（H+L）片段與辣根過(guò)氧化物酶（HRP）偶聯(lián)，在 WB 實(shí)驗(yàn)中用作二抗。 |
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Alexa Fluor® 488-conjugated AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L) 在最佳條件下，將抗鼠 IgG（H+L）片段與 Alexa Fluor® 488 偶聯(lián)。 |
MCE 的所有產(chǎn)品僅用作科學(xué)研究或藥證申報(bào)，我們不為任何個(gè)人用途提供產(chǎn)品和服務(wù)
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