首先，研究者通過對棉鈴蟲的幼蟲進行高通量miRNA測序（聯(lián)川生物提供技術服務），發(fā)現(xiàn)5個在幼蟲時期特異性表達的miRNA，并通過Northern雜交分析選定har-miR-2002b作為研究對象，利用生物學軟件預測出其作用的靶基因為絲氨酸蛋白酶（Trypsin-like Serine Protease，Ha-TLP)。隨后，利用人工合成的inhibitor和mimic喂食棉鈴蟲，結果發(fā)現(xiàn)inhibitor和mimic可成功地在棉鈴蟲幼蟲階段抑制或過表達har-MIR-2002。生物學測定表明，在喂食har-miR-2002b mimic的條件下，70%的幼蟲繁殖力降低，40%的幼蟲死亡；大部分幼蟲成蛹畸形并且成蛾率極低。通過RT-PCR驗證顯示，Ha-TLP為har-miR-2002b的靶基因。在體內(nèi)和體外的研究顯示，miRNA mimic作用下Ha-TLP轉(zhuǎn)錄本/蛋白水平和酶的活性顯著降低；相反，har-miR-2002b inhibitor作用下Ha-TLP轉(zhuǎn)錄本顯著上調(diào)。

上述研究表明，通過人工合成的miRNA mimic或inhibitor可以抑制或過表達機體內(nèi)的miRNA，并可用于miRNA后續(xù)功能的研究。

 

*Jayachandran B, Hussain M, Asgari S. 2012. An insect trypsin-like serine protease as a target of microRNA: Utilization of microRNA mimics and inhibitors by oral feeding. Insect Biochem Mol Biol[Epub ahead of print].

 

延伸閱讀：JVI：昆蟲利用siRNA而非miRNA抵御病毒侵染

 

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