酶法組織消化中常用的膠原酶（Collagenase），能特異性地降解胞外膠原蛋白，使膠原蛋白和纖維粘連蛋白的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)解離，而不損壞細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)的完整性。由于細(xì)胞外基質(zhì)的成分復(fù)雜，除膠原蛋白外，還含有彈性蛋白，糖蛋白等其他大分子結(jié)構(gòu)。而且不同組織類型，不同物種來源，不同年齡的組織中胞外基質(zhì)組份不同。所以商業(yè)化的膠原酶產(chǎn)品一般是梭狀芽孢桿菌裂解液的粗提物，是膠原酶、胰蛋白酶等蛋白水解酶混合物，能降解膠原蛋白和其他蛋白，及多糖等胞外大分子物質(zhì)，適用于多種組織的消化應(yīng)用。

 

但是對(duì)于不同實(shí)驗(yàn)研究中分離的特定組織，需要根據(jù)經(jīng)驗(yàn)來選擇合適的膠原酶產(chǎn)品，并對(duì)酶濃度、酶體積、酶作用時(shí)間進(jìn)行摸索，才能找到最佳的消化方案。

 

羅氏膠原酶產(chǎn)品提取自溶組織梭狀芽孢桿菌（Clostridium histolyticum），并根據(jù)不同的酶活和驗(yàn)證的功能應(yīng)用分為Collagenase A/B/D/P/H五類產(chǎn)品。被廣泛應(yīng)用于各種組織中（如肺、心臟、肌肉、骨、脂肪組織、肝、腎、軟骨、乳腺、胎盤、血管、腦組織和腫瘤組織等）單個(gè)細(xì)胞的分離。應(yīng)用其獲得的細(xì)胞產(chǎn)量、活度和細(xì)胞功能性均經(jīng)過嚴(yán)格的產(chǎn)品質(zhì)量控制和驗(yàn)證。

 

小貼士：

如果您的組織在酶消化分散的過程中，出現(xiàn)膠狀粘連細(xì)胞，影響細(xì)胞的分散，很可能是由于破碎細(xì)胞中DNA釋放至胞外而導(dǎo)致的粘連，可通過DNase的加入使粘連的細(xì)胞獲得更好的分散。

 

由于Collagenase粗酶中還含有各種不同的蛋白酶，如其中的淀粉酶和脂肪酶也會(huì)消化細(xì)胞表面的蛋白，對(duì)細(xì)胞造成一定的損傷。另外，粗制的膠原酶無法在不同批次產(chǎn)品間保持質(zhì)量和酶活的一致性。即使針對(duì)同一種組織，使用不同批次的膠原酶進(jìn)行消化，您仍需要對(duì)酶濃度、酶體積和酶作用時(shí)間進(jìn)行優(yōu)化。

那么如何使您的組織消化實(shí)驗(yàn)事半功倍呢？

 

羅氏Dispase^®能用于多種組織和器官的原代細(xì)胞制備，由于其溫和的特性，在消化過程中對(duì)細(xì)胞造成的損傷極小，它還能用于細(xì)胞的次代培養(yǎng)，也可用于細(xì)胞懸液中的聚團(tuán)消化解聚。Dispase^®是一種純化的中性蛋白酶，提取自多黏芽孢桿菌（Bacillus polymyxa），杜絕了支原體污染的可能性，在寬泛的pH和溫度條件下具有良好的穩(wěn)定性，因此在組織消化過程中的表現(xiàn)比膠原酶更加穩(wěn)定。

羅氏Dispase^®尤其在皮膚組織的表皮分離和上皮層細(xì)胞培養(yǎng)中獲得了廣泛的應(yīng)用。Dispase^®I與Dispase^®II兩者的差別在于純度的不同，Dispase^®I經(jīng)過濾除菌，且每mg Dispase^®I的純度和酶活遠(yuǎn)高于Dispase^®II。

 

Liberase Research Grade Enzyme Blends包含了一系列酶混合物，它們由不同比例的中性蛋白酶（非梭菌蛋白酶）和高純度Collagenase I + CollagenaseII混合組成。在絕大部分應(yīng)用中，Liberase能替換傳統(tǒng)的膠原酶，并增加細(xì)胞產(chǎn)率、細(xì)胞活性和細(xì)胞功能性。

 

在嚴(yán)格的酶發(fā)酵和純化工藝條件下，Liberase Research Grade Enzyme Blends去除了梭菌蛋白酶和胰蛋白酶等雜酶，去除了原料中>98%的內(nèi)毒素和其他死細(xì)胞成分，因此有助于在組織消化過程中，大大提升細(xì)胞的活率。Liberase系列產(chǎn)品均經(jīng)過濾除菌，具有高度的批間一致性，保證了整個(gè)實(shí)驗(yàn)階段的消化質(zhì)量和重復(fù)性。

 

羅氏膠原酶與Liberase系列產(chǎn)品的替換比較

 

小貼士：

1.  Liberase系列產(chǎn)品根據(jù)膠原酶和中性蛋白酶的不同配比，分為不同消化活性的5種產(chǎn)品。您可以參考其他實(shí)驗(yàn)室的研究或已發(fā)表文獻(xiàn)，進(jìn)行合適產(chǎn)品的選擇和操作流程參考。

https://www.roche-applied-science.com/sis/collagenase/index.jsp?id=col_030100

 

2.  對(duì)于新的組織細(xì)胞的消化嘗試，建議從Liberase TM開始您的實(shí)驗(yàn)，Liberase TM的消化活性范圍對(duì)各種組織具有良好的通用性。

 

3.  Liberase中Collagenase I + II 的純度很高，與常規(guī)膠原酶消化實(shí)驗(yàn)相比，通常需將孵育時(shí)間減少10 –30%。

 

請(qǐng)注意：Liberase Research Grade產(chǎn)品和其他消化酶產(chǎn)品僅供生命科學(xué)研究和體外研究使用。請(qǐng)勿將此產(chǎn)品用于臨床和診斷程序（如人胰島移植）。

 

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