Applied Biosystems 3730XL測(cè)序儀是高質(zhì)量的長(zhǎng)片段讀取和序列分析的測(cè)序平臺(tái),應(yīng)用靈活而廣泛。3730XL可同時(shí)分析96個(gè)樣品,該儀器采用4色熒光同時(shí)檢測(cè),可不間斷24小時(shí)運(yùn)行,自動(dòng)灌膠,上樣,電泳分離,檢測(cè)及數(shù)據(jù)分析。本儀器除了能夠完成新基因測(cè)序工作或比較測(cè)序工作外,還可進(jìn)行多種片段分析,包括微衛(wèi)星 DNA 分析,比較基因型分析,單核苷酸多態(tài)性 (SNP) 研究等。
ABI 3730XL測(cè)序儀
測(cè)序峰圖
雙脫氧鏈終止法原理
雙脫氧鏈終止法又稱為Sanger法,其原理是DNA模板在DNA聚合酶、引物、四種脫氧核苷酸三磷酸(dNTP)存在下進(jìn)行復(fù)制時(shí),在四管反應(yīng)體系中分別按一定的比例引入四種雙脫氧核苷三磷酸(ddNTP)。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3’-OH基團(tuán),當(dāng)ddNTP摻入鏈的末端時(shí),該鏈就會(huì)停止延伸。如此每管反應(yīng)體系中就產(chǎn)生了一系列長(zhǎng)度不等的以ddNTP為3’端的DNA片段。反應(yīng)終止后,分4個(gè)泳道進(jìn)行凝膠電泳以分離長(zhǎng)短不一的DNA片段,相鄰的片段長(zhǎng)度相差一個(gè)堿基。經(jīng)放射自顯影后,根據(jù)片段3’端的雙脫氧核苷,便可獲得合成片段的堿基排列順序。
Sanger法測(cè)序原理圖
ABI 3730XL測(cè)序儀技術(shù)原理
ABI 3730XL自動(dòng)測(cè)序儀是基于毛細(xì)管電泳和熒光標(biāo)記技術(shù)的DNA測(cè)序儀。基于Sanger法,3730XL測(cè)序儀擁有96道毛細(xì)管,并用熒光標(biāo)記代替了同位素標(biāo)記,從而大大提高了DNA測(cè)序的速度和準(zhǔn)確性。4種雙脫氧核苷酸(ddNTP)的堿基分別用不同的熒光進(jìn)行標(biāo)記,在通過(guò)毛細(xì)管時(shí)不同長(zhǎng)度的DNA片段上的4種熒光基團(tuán)被激光激發(fā),發(fā)出不同顏色的熒光,被CCD檢測(cè)系統(tǒng)識(shí)別,并直接翻譯成DNA序列。
儀器特點(diǎn)
1. 雙光束雙側(cè)激光激發(fā),光柵分光裝置和后置超薄CCD檢測(cè)成像系統(tǒng)。
2. 自動(dòng)灌膠、上樣、電泳分離、檢測(cè)及數(shù)據(jù)分析,可連續(xù)運(yùn)行24小時(shí)無(wú)需人工干預(yù)。
3. 一次電泳測(cè)定96個(gè)樣品,一天可跑12次測(cè)序電泳,每天的測(cè)序產(chǎn)率是1152個(gè)樣品。
4. 自動(dòng)堿基識(shí)別、基因型分析與質(zhì)量評(píng)分判定。
5. 最新POP-7液體分離膠,動(dòng)態(tài)內(nèi)鍍毛細(xì)管壁,使讀序長(zhǎng)度達(dá)1000bp以上,精確讀序達(dá)800bp。
6. 良好的溫控裝置提供了更大的溫控范圍(18~70℃),電泳溫度可達(dá)70℃,有助于去除二級(jí)結(jié)構(gòu)的影響。
7. 高靈敏度減少DNA和測(cè)序試劑的使用量。
8. 更高的自動(dòng)化減少勞力成本及人為失誤的成本。
技術(shù)應(yīng)用
1. 菌液、質(zhì)粒、PCR產(chǎn)物測(cè)序
2. Fosmid/Cosmid/BAC雙末端測(cè)序
3. 大片段鳥槍法測(cè)序
4. EST測(cè)序和分析
5. 步移測(cè)序
6. SNP發(fā)現(xiàn)和重測(cè)序
7. STR分型
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