Genome Sequencer FLX (GS FLX)系統(tǒng)是羅氏454 公司的第二代測(cè)序臺(tái)，GS FLX的命名正是來(lái)源于其在多領(lǐng)域的靈活(flexible)應(yīng)用。隨著該系統(tǒng)性能和應(yīng)用領(lǐng)域的不斷提升和擴(kuò)展，必將帶動(dòng)整個(gè)測(cè)序領(lǐng)域的技術(shù)發(fā)展，對(duì)大規(guī)模基因序列研究的相關(guān)應(yīng)用領(lǐng)域產(chǎn)生巨大的推動(dòng)作用。美吉生物以先進(jìn)的羅氏454高通量測(cè)序平臺(tái)、專(zhuān)業(yè)的科研團(tuán)隊(duì)、個(gè)性化的實(shí)驗(yàn)方案，為您打造優(yōu)質(zhì)的高通量測(cè)序服務(wù)。

Genome Sequencer FLX System

型號(hào)：GS FLX System

試劑：long-read GS FLX Titanium chemistry

產(chǎn)量：100萬(wàn)序列∕Run

讀長(zhǎng)：400bp以上

應(yīng)用：基因組de novo測(cè)序、轉(zhuǎn)錄組de novo測(cè)序、宏基因組測(cè)序、重測(cè)序

貢獻(xiàn)：應(yīng)用此技術(shù)已經(jīng)發(fā)表1026篇學(xué)術(shù)論文

發(fā)展： 2011年將實(shí)現(xiàn)測(cè)序讀長(zhǎng)達(dá)到1000bp

測(cè)序原理

          GS FLX系統(tǒng)的測(cè)序原理是基于焦磷酸測(cè)序法，依靠生物發(fā)光對(duì)DNA序列進(jìn)行檢測(cè)。在DNA聚合酶，ATP硫酸化酶，熒光素酶和雙磷酸酶的協(xié)同作用下，GS FLX系統(tǒng)將引物上每一個(gè)dNTP的聚合與一次熒光信號(hào)釋放偶聯(lián)起來(lái)。通過(guò)檢測(cè)熒光信號(hào)釋放的有無(wú)和強(qiáng)度，就可以達(dá)到實(shí)時(shí)測(cè)定DNA序列的目的。此技術(shù)不需要熒光標(biāo)記的引物或核酸探針，也不需要進(jìn)行電泳；具有分析結(jié)果快速、準(zhǔn)確、高靈敏度和高自動(dòng)化的特點(diǎn)。

GS FLX高通量測(cè)序方法原理示意圖

實(shí)驗(yàn)流程

GS FLX系統(tǒng)減少了傳統(tǒng)測(cè)序樣品制備過(guò)程中對(duì)大型自動(dòng)站的依賴(lài)，完全不需要進(jìn)行繁瑣的建庫(kù)過(guò)程，也不必進(jìn)行克隆挑取、微孔板處理等工作，利用創(chuàng)新的磁珠和emPCR技術(shù)進(jìn)行樣品制備，同時(shí)提供完整的后續(xù)生物信息學(xué)分析解決方案。 1) 樣品種類(lèi)：GS FLX系統(tǒng)支持各種不同來(lái)源的樣品序列測(cè)定，包括基因組DNA，PCR產(chǎn)物，BACs，cDNA及小分子RNA等，不同類(lèi)型的樣品測(cè)序都可在一臺(tái)儀器上完成。 2) 樣品DNA打斷：樣品如基因組DNA或BAC等被打斷成300-800bp的片段；對(duì)于小分子的非編碼RNA，這一步驟并不需要。短的PCR產(chǎn)物則可利用GS融合引物擴(kuò)增后直接進(jìn)行步驟4)。 3) 加接頭：借助一系列標(biāo)準(zhǔn)的分子生物學(xué)技術(shù)，將3′端和5′端有特異性的A和B接頭連接到DNA片段上。接頭也將在后繼的純化，擴(kuò)增和測(cè)序步驟中用到。圖中僅僅顯示了后續(xù)步驟中要用到的單鏈的DNA片段。 4)  一條DNA片段＝一個(gè)磁珠：接頭使成百上千條DNA片段分別結(jié)合到一個(gè)磁珠上，磁珠被單個(gè)油水混合小滴包被后，在這個(gè)小滴里進(jìn)行獨(dú)立的擴(kuò)增，而沒(méi)有其他的競(jìng)爭(zhēng)性或者污染性序列的影響；所有DNA片段進(jìn)行平行擴(kuò)增(emPCR)。 5) 一個(gè)磁珠＝一條讀長(zhǎng)：經(jīng)過(guò)emPCR擴(kuò)增后，每個(gè)磁珠上的DNA片段擁有了成千上萬(wàn)個(gè)相同的拷貝。經(jīng)過(guò)富集以后，這些片段仍然和磁珠結(jié)合在一起，隨后就可以放入到Pico Titer Plate板中供后繼測(cè)序使用了。 6) 數(shù)據(jù)讀取和分析工具：GS FLX 系統(tǒng)提供三種不同的生物信息學(xué)工具對(duì)測(cè)序數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，適用于不同的應(yīng)用。例如多達(dá)3GB序列的重測(cè)序，對(duì)比已知參考序列進(jìn)行的擴(kuò)增產(chǎn)物差異分析及 120MB的從頭測(cè)序工作等。