1、 原理及用途
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測番茄醬、辣椒醬、蛋等樣本中的蘇丹紅（Sudan，SUD），試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標板、酶標記物、抗體、標準品及其他配套試劑組成。檢測時，加入標準品或樣品溶液，樣本中的蘇丹紅和酶標板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗蘇丹紅抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與其所含蘇丹紅含量成負相關(guān)，與標準曲線比較即可得出樣本中蘇丹紅的殘留量。

2、 技術(shù)指標
2.1 試劑盒靈敏度：0.3ppb(ng/ml)
2.2 反應(yīng)模式：25℃，30min～30min～15min
2.3 檢測下限：
番茄汁/番茄醬/辣椒醬………………12ppb
辣椒粉(辣椒面）/飼料………………120ppb
蛋類(雞蛋、鴨蛋、鵝蛋）……………30ppb
2.4 交叉反應(yīng)率：
蘇丹紅…………………………………100%
對位紅…………………………………123%
羅丹明…………………………………8%
2.5 樣本回收率：
番茄汁/番茄醬/辣椒醬…………80% ±15%
辣椒粉(辣椒面）/飼料…………95% ±15%
蛋類(雞蛋、鴨蛋、鵝蛋） ……80% ±15%

3、 試劑盒組成
酶標板……………………………96孔
高濃度標準品溶液1瓶（1ml/瓶）： 1.0ppm（高標準液有揮發(fā)性，需注意密封）
標準品溶液0ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb、24.3ppb（均為空瓶子，現(xiàn)配現(xiàn)用，）。
酶標記物（紅蓋）……………………11ml
抗體工作液（藍蓋）…………………5.5ml
底物液A（白蓋）……………………6ml
底物液B（黑蓋）……………………6ml
終止液（黃蓋）………………………6ml
20×濃縮洗滌液（白蓋）……………40ml
說明書…………………………………1份
蓋板膜…………………………………1張
自封袋…………………………………1個

4、 需要的器材和試劑
4.1 儀器：酶標儀、打印機、均質(zhì)器 、氮氣吹干裝置、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平（感量0.01g）
4.2 微量移液器：單道20µl-200µl，100µl-1000µl、多道300µl
4.3 試劑：甲醇

5、 樣本前處理
5.1 樣本處理前須知：
實驗器具必須潔凈并使用一次性吸頭，以避免污染干擾實驗結(jié)果。
5.2 配液：
配液1：10%甲醇
取10ml甲醇加入90ml去離子水中，混勻，密閉備用。
配液2：工作洗滌液
將濃縮洗滌液20倍稀釋(1份洗滌液加19份去離子水)。
5.3 樣本前處理步驟：
5.3.1 番茄汁、番茄醬、辣椒醬
1）稱取2g±0.05g均質(zhì)樣品于離心管中，加入10ml甲醇，振蕩5分鐘，室溫下4000轉(zhuǎn)/分鐘以上離心10分鐘；
2）取100µl上清液與700µl去離子水混勻；
3）取50µl用于分析。  
    樣本稀釋倍數(shù)：40    檢測下限：12ppb
5.3.2 辣椒粉、飼料
1）稱取1g±0.05g樣本于離心管中，加入10ml甲醇，振蕩5分鐘，室溫下4000轉(zhuǎn)/分鐘以上離心10分鐘；
2）取20µl上清液與780µl 10%甲醇混勻；
3）取50µl液體用于分析。
    樣本稀釋倍數(shù):400    檢測下限：120ppb  
5.3.3 蛋類(雞蛋、鴨蛋、鵝蛋）
1）用均質(zhì)器低速均質(zhì)蛋類樣本（熟蛋取樣蛋黃，生蛋取樣全蛋）；
2）稱取1g±0.05g均質(zhì)后蛋類樣本于離心管中，加入9ml甲醇，振蕩5分鐘（劇烈振蕩，將成團樣本振散開并充分混勻），15℃ 4000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘；
3）取100µl上清液與900µl去離子水混勻；
4）取50µl用于分析。
    樣本稀釋倍數(shù):100    檢測下限：30ppb  
備注：如樣品嚴重污染、較多雜質(zhì)或殘留物嚴重超標，應(yīng)進
一步稀釋后重新分析。

6、 酶聯(lián)免疫試驗步驟
將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出，置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時可能會有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解，每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架，將不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。
實驗開始前需配制標準品液；低濃度的標準品不穩(wěn)定（有光會降解，配制時需用深色瓶子），需現(xiàn)配現(xiàn)用。
在0ppb的瓶中加10%甲醇3ml，0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb的瓶中分別加10%甲醇2ml，24.3ppb的瓶中加10%甲醇2.93ml。
標準品液6：取1.0ppm高濃度標準品溶液73ul加入裝有2.93ml 10%甲醇的24.3ppb的瓶中，蓋緊，混勻，濃度即為24.3ppb。
標準品液5：取1ml標準液6加入裝有2ml 10%甲醇的8.1ppb的瓶中，蓋緊，混勻，濃度即為8.1ppb。
標準品液4：取1ml標準液5加入裝有2ml 10%甲醇的2.7ppb的瓶中，蓋緊，混勻，濃度即為2.7ppb。
標準品液3：取1ml標準液4加入裝有2ml 10%甲醇的0.9ppb的瓶中，蓋緊，混勻，濃度即為0.9ppb。
標準品液2：取1ml標準液3加入裝有2ml 10%甲醇的0.3ppb的瓶中，蓋緊，混勻，濃度即為0.3ppb。
標準品液1：直接使用10%甲醇的，濃度即為0ppb。
6.1 編    號：將樣本和標準品對應(yīng)微孔按序編號，每個樣本和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
6.2 加樣反應(yīng)：加標準品或樣本50µl/孔到各自的微孔中，然后加抗體工作液50µl/孔，輕輕振蕩5秒混勻，25℃避光反應(yīng)30分鐘。
6.3 洗    滌：小心揭開蓋板膜，甩去孔內(nèi)液體，每孔加350µl工作洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，最后一次拍干（用吸水紙拍干，拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
6.4 加酶反應(yīng)：加酶標記物100µl/孔，25℃避光反應(yīng)30分鐘。
6.5 洗    滌：同上
6.6 顯    色：加底物液A 50µl/孔，再加底物液B 50µl/孔，輕輕振蕩5秒混勻，25℃避光顯色15分鐘（若藍色過淺，可適當延長反應(yīng)時間）。
6.7 終    止：每孔加入終止液50µl，輕輕振蕩混勻，終止反應(yīng)。
6.8 測吸光值：用酶標儀于450nm處測定每孔吸光度值（建議用雙波長450/630nm）。測定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。

7、 結(jié)果分析
7.1 百分吸光率的計算
    標準液或樣本的百分吸光率等于標準液或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以第一個標準液（0ppb）的吸光度值，再乘以100%，即

百分吸光度值（%）＝	A	×100%
	A0

A—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值
A0—0ppb標準溶液的平均吸光度值
7.2 標準曲線的繪制與計算
以標準液百分吸光率為縱坐標，對應(yīng)的標準液濃度（ppb）的對數(shù)為橫坐標，繪制標準液的半對數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測物的實際濃度。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算，更便于大量樣本的準確、快速分析。（歡迎來電索取）

8、 注意事項
8.1 室溫低于25℃或試劑及樣本沒有回到室溫（25℃）會導致所有標準的OD值偏低。
8.2 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會出現(xiàn)標準曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進行下一步操作。
8.3 混合要均勻，洗板要徹底，在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性。
8.4 在所有孵育過程中，用蓋板膜封住微孔板，避免光線照射。
8.5 不要使用過了有效期的試劑盒，不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
8.6 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當棄之。0標準的吸光度值小于0.5個單位（A450nm< 0.5 ）時，表示試劑可能變質(zhì)。
8.7 反應(yīng)終止液有腐蝕性，避免接觸皮膚。

9、 貯藏及保存期
儲藏條件：試劑盒于2-8℃保存，避免冷凍。
保 質(zhì) 期：該產(chǎn)品有效期為1年，生產(chǎn)日期見包裝盒。