• 低剪切力和高效的氣體傳遞，有利于細(xì)胞生長
• 溫度和CO₂濃度的精確控制，確保細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境的穩(wěn)定性
• 旋轉(zhuǎn)速度和方向的智能調(diào)整，促進(jìn)細(xì)胞聚集體的均勻生長

研究方向
大規(guī)模細(xì)胞冷凍保存的可行性

圖1 細(xì)胞冷凍保存效果比較

使用50 mL冷凍袋進(jìn)行大規(guī)模細(xì)胞冷凍保存，與傳統(tǒng)冷凍管相比，可以一次性冷凍多達(dá)十億個人類iPSCs細(xì)胞。

細(xì)胞復(fù)蘇后的活性和聚集率

圖2 不同細(xì)胞系在解凍后與未冷凍組的活性、聚集率的對比

冷凍保存的細(xì)胞在解凍后的活性略有下降，但與未冷凍的對照組相比，性能降低在3天內(nèi)通過生物量產(chǎn)量得到了補償。冷凍保存的細(xì)胞在CERO 3D生物反應(yīng)器中擴(kuò)增時，其聚集率與未冷凍的細(xì)胞相比沒有顯著差異。

干細(xì)胞特性的維持

圖3 通過流式細(xì)胞術(shù)（FCM）和免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC）分析維持多能性蛋白水平的研究

在解凍和擴(kuò)增過程中，細(xì)胞的多能性得到了保持，這通過流式細(xì)胞術(shù)（FCM）、免疫細(xì)胞化學(xué)染色（ICC）和定量實時聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）得到了驗證。

干細(xì)胞標(biāo)志物（如POU5F1、NANOG和SOX2）的表達(dá)在冷凍保存和擴(kuò)增過程中保持穩(wěn)定。

神經(jīng)分化潛力的評估
基因編輯的細(xì)胞系BIONi010-C-41在冷凍保存后仍能成功分化為成熟的神經(jīng)元。
 

圖4 DOX誘導(dǎo)的iPSCs細(xì)胞的神經(jīng)分化

冷凍保存的細(xì)胞在神經(jīng)分化過程中表現(xiàn)出了與未冷凍細(xì)胞相似的基因和蛋白質(zhì)表達(dá)模式，盡管在第4天時神經(jīng)標(biāo)志物的表達(dá)有所延遲，但在第9天時已得到補償。

細(xì)胞治療的潛在應(yīng)用
研究證明了使用高細(xì)胞濃度和體積的冷凍保存袋進(jìn)行冷凍保存，是一種避免預(yù)培養(yǎng)并實現(xiàn)批量細(xì)胞數(shù)量的時間和成本效益高的合適技術(shù)。

該技術(shù)為未來基于hiPSC的細(xì)胞治療提供了一種新的策略，有助于推動研究和治療領(lǐng)域的發(fā)展。

CERO的創(chuàng)新技術(shù)為細(xì)胞治療領(lǐng)域帶來了新的可能性。未來，我們期待這種技術(shù)能夠進(jìn)一步優(yōu)化，以適應(yīng)不同類型細(xì)胞的培養(yǎng)需求，并在臨床應(yīng)用中實現(xiàn)更廣泛的應(yīng)用。