HK-2細(xì)胞屬源于正常腎的近曲小管細(xì)胞，通過導(dǎo)入HPV-16 E6/E7基因而獲得永生化。將含有HPV-16 E6/E7基因的重組的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pLXSN 16 E6/E7轉(zhuǎn)染外生包裝細(xì)胞Psi-2；Psi-2細(xì)胞產(chǎn)生的病毒再去感染兼嗜性包裝細(xì)胞系PA317，最后將PA317細(xì)胞產(chǎn)生的病毒顆粒導(dǎo)入正常的腎皮質(zhì)近曲小管細(xì)胞。盡管pLXSN 16 E6/E7中含有新霉素抗性，但未用G418篩選轉(zhuǎn)導(dǎo)克隆。Southern和FISH分析顯示，HK-2細(xì)胞來源于單克隆。PCR檢測(cè)證實(shí)，HK-2細(xì)胞基因組中含有E6/E7基因。

細(xì)胞名稱：人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞(STR鑒定正確)

細(xì)胞簡(jiǎn)稱：HK-2

產(chǎn)品貨號(hào)：TCH-C400

種屬來源：人

組織來源：腎

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

培養(yǎng)體系：MEM＋10% FBS＋1% P/S

配套培養(yǎng)基貨號(hào)：TCH-G400

傳代比例：1:3-1:4，每2-3天換液一次

傳代周期：24-48 h

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%CO2，溫度：37℃

凍存條件：60%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+30%FBS+10%DMSO，液氮儲(chǔ)存

質(zhì)量檢測(cè)：細(xì)菌、真菌、支原體檢測(cè)均為陰性

 

1. 出現(xiàn)空泡
空泡問題需要結(jié)合⽣⻓速度和形態(tài)來看：如果⽣⻓速度和形態(tài)正常，空泡可能是正常的細(xì)胞活動(dòng)，傳代后空泡即可減輕。
如果⽣⻓較慢，形態(tài)異常，空泡可能是⾃噬⾏為，可加⼤⾎清⽐例（不超過20%）或更換⾎清品牌改善細(xì)胞狀態(tài)。

2. 出現(xiàn)拉絲
細(xì)胞伸出細(xì)⻓的絲有兩種情況：
第⼀種：細(xì)胞遷移造成的，細(xì)胞在培養(yǎng)⽫上并不是靜態(tài)的，也會(huì)出現(xiàn)遷移。遷移時(shí)細(xì)胞的⼀部分滯留在原處，遷移的過程中會(huì)拉出⼀條細(xì)⻓的絲。這種情況下拉絲的細(xì)胞占少數(shù)，細(xì)胞整體的⽣⻓狀態(tài)是正常的，不⽤特殊處理。
第⼆種：細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)不良，拉絲的細(xì)胞占⼤多數(shù)，同時(shí)細(xì)胞⽣⻓緩慢，此時(shí)可以提⾼⾎清⽐例（不超過20%）或添加5 ng/mL EGF。

3. 形態(tài)不對(duì)
正常的HK-2呈鋪路⽯狀⽣⻓，如果細(xì)胞呈鐮⼑狀或不規(guī)則狀，可能是因?yàn)榕囵B(yǎng)環(huán)境發(fā)⽣了較⼤的改變，⽐如從有⾎清到⽆⾎清的轉(zhuǎn)換，此時(shí)換回原來的培養(yǎng)條件細(xì)胞可逐漸恢復(fù)；如果細(xì)胞變得細(xì)⻓，這時(shí)候可能是營(yíng)養(yǎng)不良。

4. ⽣⻓緩慢
在標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)條件（MEM+10%FBS+1%PS），以及1：3傳代條件下，HK-2的傳代周期約為3天；
當(dāng)細(xì)胞⽣⻓緩慢，⼀周⽆法傳代時(shí)，需要考慮培養(yǎng)基特別是⾎清是否合適；選擇合適的培養(yǎng)基及⾎清，同時(shí)加⼤細(xì)胞接種密度可以改善；
⾎清質(zhì)量差異可能引起細(xì)胞狀態(tài)變化，建議選⽤⾼質(zhì)量的胎⽜⾎清。