在現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)研究中，流式細(xì)胞術(shù)（Flow Cytometry）已經(jīng)成為不可或缺的分析工具。它能夠通過(guò)分析單細(xì)胞的多參數(shù)特性，揭示細(xì)胞間的復(fù)雜異質(zhì)性。而在這一領(lǐng)域，流式細(xì)胞指紋（Flow Cytometry Fingerprint）作為一種前沿技術(shù)，正在為我們揭示細(xì)胞微觀(guān)世界的更多奧秘。特別是在納米流式領(lǐng)域，CytoFLEX nano憑借其獨(dú)特的技術(shù)優(yōu)勢(shì)，正在引領(lǐng)這一領(lǐng)域的革命性進(jìn)展。

什么是流式細(xì)胞指紋？

流式細(xì)胞指紋是指通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)獲得的細(xì)胞或顆粒的特定光學(xué)特征，這些特征包括散射光和熒光信號(hào)。每一種細(xì)胞或顆粒都有其獨(dú)特的指紋圖譜，這些圖譜反映了它們的物理和生物化學(xué)特性。通過(guò)對(duì)這些指紋圖譜的分析，研究人員能夠識(shí)別并分類(lèi)不同類(lèi)型的細(xì)胞，甚至可以在同一細(xì)胞群體中發(fā)現(xiàn)不同的亞群。

傳統(tǒng)納米流式在細(xì)胞外囊泡（Extracellular Vesicles, EVs）領(lǐng)域的挑戰(zhàn)

盡管流式細(xì)胞術(shù)在細(xì)胞分析中取得了巨大進(jìn)展，但在傳統(tǒng)納米流式領(lǐng)域仍面臨一些獨(dú)特的挑戰(zhàn)。一個(gè)主要問(wèn)題是缺乏免疫分型的共識(shí)，并且同時(shí)檢測(cè)的熒光信號(hào)非常有限。

目前，細(xì)胞外囊泡（Extracellular Vesicles, EVs）亞群的研究還在起步階段，并沒(méi)有像免疫學(xué)中那樣成熟。免疫細(xì)胞可以通過(guò)多色免疫分析，利用不同的CD分子的表達(dá)譜型（指紋）去定義其亞群，但在EV的研究中，類(lèi)似的標(biāo)記和分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)尚未建立,并且相較于免疫細(xì)胞，EV有著更豐富的多樣性，可供標(biāo)記的潛在靶點(diǎn)也更多。

CytoFLEX nano的革命性突破

CytoFLEX nano作為一款先進(jìn)的納米流式細(xì)胞儀，通過(guò)結(jié)合散射光和熒光信號(hào)的綜合分析，顯著提高了檢測(cè)的準(zhǔn)確性和靈敏度。

6熒光通道檢測(cè)能力，實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)指紋描述：

CytoFLEX nano能夠同時(shí)檢測(cè)6 個(gè)熒光通道，提供更加全面和詳細(xì)的EV熒光指紋信息。

5散射光通道檢測(cè)能力，釋放無(wú)限潛力：

CytoFLEX nano分析儀通過(guò)提供5個(gè)側(cè)向散射通道擴(kuò)展了您的研究可能性。通過(guò)分析不同散射的比率來(lái)研究新群體，而無(wú)需依賴(lài)染料進(jìn)行鑒定或分離。這種創(chuàng)新方法不僅提高了實(shí)驗(yàn)的靈活性和精度，還為細(xì)胞外囊泡研究提供了新的可能性和洞察力。CytoFLEX nano分析儀無(wú)疑是未來(lái)EV多樣性研究的重要工具。

高靈敏度，確保捕捉每一個(gè)潛在的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象與信號(hào)

在一個(gè)細(xì)胞外囊泡（EV）上，可能只有10個(gè)抗原的拷貝，而目前的流式細(xì)胞儀無(wú)法測(cè)量如此少量的抗原。CytoFLEX nano流式細(xì)胞儀的主要優(yōu)勢(shì)在于其改進(jìn)的散射和熒光靈敏度，使得可以測(cè)量更小的顆粒并檢測(cè)低密度的抗原。

高階算法應(yīng)用：利用Cytobank解析EV“指紋”

高階算法的引入為細(xì)胞外囊泡（EV）研究帶來(lái)了革命性的變化。Cytobank平臺(tái)提供了一系列強(qiáng)大的高階數(shù)據(jù)分析工具，如ViSNE、FlowSOM、SPADE和CITRUS，這些工具能夠高效解析流式細(xì)胞數(shù)據(jù)，揭示復(fù)雜的生物學(xué)特征。

這些高階算法在解析EV“指紋”中的應(yīng)用，使得研究人員能夠更精準(zhǔn)地解析流式細(xì)胞數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)傳統(tǒng)方法難以識(shí)別的細(xì)微差異。例如：

癌癥診斷：利用ViSNE分析癌癥患者血液中的EV，發(fā)現(xiàn)特定的EV亞群與癌癥類(lèi)型和階段相關(guān)聯(lián)，為早期診斷和個(gè)性化治療提供了新的生物標(biāo)志物。

心血管疾病研究：通過(guò)FlowSOM聚類(lèi)分析心血管疾病患者的EV數(shù)據(jù)，識(shí)別出與疾病進(jìn)展相關(guān)的特定EV亞群，為疾病機(jī)制研究提供了重要線(xiàn)索。

免疫監(jiān)測(cè)：利用SPADE分析免疫治療前后患者的EV變化，揭示免疫反應(yīng)的動(dòng)態(tài)過(guò)程，為評(píng)估治療效果提供了新的視角。

差異分析：使用CITRUS對(duì)不同病理狀態(tài)下的EV進(jìn)行差異分析，發(fā)現(xiàn)與疾病相關(guān)的特定細(xì)胞亞群，幫助識(shí)別潛在的生物標(biāo)志物。
von Lersner, Ariana K., et al. "Multiparametric single-vesicle flow cytometry resolves extracellular vesicle heterogeneity and reveals selective regulation of biogenesis and cargo distribution." ACS nano 18.15 (2024):10464-10484.

所見(jiàn)即所得，利用CytoFLEX SRT實(shí)現(xiàn)分選與分析的相互驗(yàn)證。

CytoFLEX nano不僅讓研究人員能夠在EV分析階段實(shí)現(xiàn)“所見(jiàn)”，更通過(guò)CytoFLEX SRT的精確分選功能，將這些識(shí)別出的EV亞群進(jìn)行進(jìn)一步的分選和深入分析，實(shí)現(xiàn)“所得”。這種協(xié)同工作流程，確保了數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可靠性。

CytoFLEX nano與CytoFLEX SRT的結(jié)合，為EV研究提供了一個(gè)強(qiáng)大的工具組合。前者通過(guò)高靈敏度的多通道檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞群體的初步識(shí)別；后者則通過(guò)精準(zhǔn)的分選功能，對(duì)這些群體進(jìn)行進(jìn)一步的驗(yàn)證和分析。這一協(xié)同工作流程，使研究人員能夠在分子水平上揭示EV的復(fù)雜特征和生物學(xué)功能，開(kāi)拓新的研究領(lǐng)域和應(yīng)用前景。

通過(guò)這種多種方法的聯(lián)動(dòng)，科學(xué)家們能夠更全面地理解EV的特性，從而在疾病診斷、治療和預(yù)防中發(fā)揮更大的作用。CytoFLEX nano和CytoFLEX SRT的完美結(jié)合，真正實(shí)現(xiàn)了分選與分析的相互驗(yàn)證，盡可能捕捉到每一個(gè)潛在的EV亞群。



John Tigges, Director

Flow Cytometry Core Facility and Center for Extracellular Vesicle Detection, Beth lsrael Deaconess Medical Center

“Having all these scatters at hand together with the greater sensitivity gives you the power to ask, what could I do now?lt opens up new research possibilities.

“擁有這些散射通道以及更高的靈敏度，讓你可以問(wèn)自己，我現(xiàn)在還能做些什么?這開(kāi)啟了新的研究可能性。”


數(shù)據(jù)示例：

通過(guò)流式分選驗(yàn)證散射光流式細(xì)胞指紋的真實(shí)性
在細(xì)胞外囊泡（EVs）的研究中，準(zhǔn)確識(shí)別和表征其特性是至關(guān)重要的。使用CytoFLEX Nano流式細(xì)胞儀，我們能夠通過(guò)高靈敏度的散射光檢測(cè)捕捉到EVs的初步指紋信號(hào)。然而，為了驗(yàn)證這些散射光指紋的真實(shí)性，我們進(jìn)一步利用CytoFLEX SRT進(jìn)行精確分選。通過(guò)分選前后的對(duì)比分析，并使用標(biāo)準(zhǔn)微球驗(yàn)證散射光信號(hào)的差異，我們確保了這些指紋的準(zhǔn)確性和可靠性。
使用CytoFLEX SRT對(duì)在CytoFLEX Nano上觀(guān)察到的不同散射差異信號(hào)進(jìn)行分選，并通過(guò)回測(cè)確認(rèn)這些差異的真實(shí)存在。同時(shí)，CytoFLEX SRT的精確分選功能也得到了驗(yàn)證。


結(jié)語(yǔ)

CytoFLEX家族和Cytobank的結(jié)合，為細(xì)胞外囊泡（EVs）研究提供了一個(gè)強(qiáng)大且全面的分析工具組合。通過(guò)納米流式細(xì)胞術(shù)，研究人員能夠捕捉到EVs的復(fù)雜指紋信號(hào)，并通過(guò)精確分選技術(shù)，進(jìn)一步驗(yàn)證和深入分析這些信號(hào)的真實(shí)性。這種多方法學(xué)聯(lián)動(dòng)，不僅提高了數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可靠性，還揭示了EVs在不同生理和病理狀態(tài)下的潛在作用。

高靈敏度的散射光和熒光檢測(cè)能力，加上Cytobank平臺(tái)的高階算法，使得研究人員能夠更全面地理解EVs的特性，從而在疾病診斷、治療和預(yù)防中發(fā)揮更大的作用。通過(guò)這些先進(jìn)技術(shù)的應(yīng)用，EVs研究已經(jīng)進(jìn)入了一個(gè)新的紀(jì)元，開(kāi)創(chuàng)了更多的研究領(lǐng)域和應(yīng)用前景。

CytoFLEX nano和CytoFLEX SRT的完美結(jié)合，為現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)研究帶來(lái)了前所未有的便利和創(chuàng)新。未來(lái)，我們有理由相信，隨著技術(shù)的不斷進(jìn)步和應(yīng)用的不斷深入，流式細(xì)胞術(shù)將繼續(xù)在EVs研究中發(fā)揮關(guān)鍵作用，為生命科學(xué)的探索開(kāi)辟更多可能性。

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