腦作為人類最復(fù)雜的器官，這些不同腦區(qū)具有特殊的輸入輸出連接，發(fā)揮各種重要的功能。在人腦發(fā)育過程中，通過內(nèi)在基因程序產(chǎn)生了復(fù)雜的細(xì)胞類型。在這些細(xì)胞類型中，有些已經(jīng)有了明確的特征，但還有許多尚待清晰描述。因此，在人類腦區(qū)逐漸特化的發(fā)育過程中，腦細(xì)胞類型的變化特征和空間分布特點(diǎn)需要進(jìn)行全面、系統(tǒng)地研究。

近幾年，單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究探索了人腦特定區(qū)域以及發(fā)育早期的多個(gè)區(qū)域，同時(shí)極少的空間組學(xué)研究聚焦于發(fā)育早期孕6周（gastrulation week 6，GW6）左右單個(gè)時(shí)間點(diǎn)的人腦空間圖譜。然而，目前還缺乏對(duì)腦發(fā)育后期連續(xù)時(shí)間點(diǎn)的高分辨率空間研究�？紤]到人腦體積在發(fā)育過程中的急速擴(kuò)張，這對(duì)于探索人腦的發(fā)育，特別是區(qū)域特化研究提出了巨大的挑戰(zhàn)。

2023年12月12日，中國科學(xué)院動(dòng)物研究所焦建偉研究組、廣州國家實(shí)驗(yàn)室董驥研究組、北京大學(xué)杜鵬研究組和北京大學(xué)靳蕾研究組合作在Cell雜志在線發(fā)表了題為Spatiotemporal transcriptome atlas reveals the regional specification of the developing human brain的文章。該研究將單細(xì)胞測(cè)序（scRNA-seq）和單細(xì)胞空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)（scStereo-seq）相結(jié)合，首次解析了迄今為止跨時(shí)間點(diǎn)最廣（GW6-GW23）、面積最大(最大4cm x 3cm)的人腦多區(qū)域時(shí)空發(fā)育轉(zhuǎn)錄組圖譜。

該研究鑒定并呈現(xiàn)了發(fā)育早期具有特定空間分布特點(diǎn)的異質(zhì)性放射狀膠質(zhì)細(xì)胞亞型，揭示了這些異質(zhì)性放射狀膠質(zhì)細(xì)胞有助于隨后不同腦區(qū)神經(jīng)元的特化，同時(shí)發(fā)現(xiàn)膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元互作也會(huì)促進(jìn)神經(jīng)元的區(qū)域特化。利用10x Genomics單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)scRNA-seq，作者繪制了來自人類胚胎不同腦區(qū)（包括Cor、Dien、Mid、Cere在內(nèi)），多個(gè)發(fā)育時(shí)間點(diǎn)（GW6、GW8、GW10、GW12、GW14、GW16和GW23）的單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組圖譜 (共228,047個(gè)細(xì)胞)。根據(jù)經(jīng)典的標(biāo)記基因，作者鑒定出神經(jīng)前體細(xì)胞（NPC）、谷氨酸能神經(jīng)元、GABA能神經(jīng)元、少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞神經(jīng)外胚層來源的主要細(xì)胞類型，以及中胚層來源的細(xì)胞類型（如內(nèi)皮細(xì)胞，周皮細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞）等。同時(shí)，作者使用時(shí)空組學(xué)技術(shù)Stereo-seq，對(duì)人腦多個(gè)發(fā)育時(shí)間點(diǎn)（GW6、GW8、GW10、GW12和GW16）進(jìn)行空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序。通過可視化主要細(xì)胞類型的空間分布，本文揭示了發(fā)育中人腦不同腦區(qū)由不同細(xì)胞類型組成的有序分布模式 。
 

人腦時(shí)空發(fā)育圖譜分析概覽

為了理解人腦中NPC的分子異質(zhì)性，研究人員用經(jīng)典標(biāo)記基因?qū)�NPC重新分為五個(gè)亞類，包括放射狀膠質(zhì)細(xì)胞（RG）、Cor特異的中間祖細(xì)胞（IPC）、Cere特異的顆粒細(xì)胞前體（GCP）、前體1（Prec1）和前體2（Prec2）。在五個(gè)NPC亞型中，RG最先出現(xiàn)，且在該階段已表現(xiàn)出明顯的區(qū)域異質(zhì)性，其中研究人員發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄因子TFAP2C特異性在人大腦皮層RG中表達(dá)并能夠決定大腦RG細(xì)胞的命運(yùn)。接著，研究人員將各腦區(qū)的RG細(xì)胞進(jìn)一步分群并觀察空間分布特點(diǎn)。Cor RG分為oRG和vRG，空間可視化后發(fā)現(xiàn)oRG在額葉（FL）的比例明顯高于枕葉 (OL); 研究人員將Dien RG分為Dien RG-1和Dien RG-2，其中Dien RG-1高表達(dá)DLX1、DLX2，而Dien RG-2高表達(dá)TPBG，且發(fā)現(xiàn)Dien RG-1主要分布在Dien腹側(cè)，而Dien RG-2主要分布在Dien背側(cè)；對(duì)于Mid RG, 除了Mid RG-4已有研究報(bào)導(dǎo)，其他5個(gè)亞型均是本研究首次鑒定且均具有獨(dú)特的空間分布特點(diǎn)。Cere RG分為4個(gè)亞型：菱形唇 (RL)-RG、腦室區(qū) (VZ)-RG、伯明翰膠質(zhì)細(xì)胞 (B glia)、以及腦干RG。其中VZ-RG（GABA能神經(jīng)元的起源）在GW8和GW10時(shí)已經(jīng)很明顯，而RL-RG（興奮性神經(jīng)元的來源）在GW10時(shí)開始增加，表明小腦不同起源神經(jīng)元的發(fā)育時(shí)間差異�？臻g可視化不僅展示了RG亞型的空間分布，而且為后期神經(jīng)元區(qū)域特化提供了關(guān)鍵線索。

為了研究發(fā)育中人腦各區(qū)域神經(jīng)元的時(shí)空動(dòng)力學(xué)特征，根據(jù)差異表達(dá)基因，研究人員將62,520個(gè)谷氨酸能神經(jīng)元和59,062個(gè)GABA能神經(jīng)元分別進(jìn)一步分為17個(gè)和20個(gè)亞群，并將其中主要亞群映射到空間中。這些神經(jīng)元亞群表現(xiàn)出明顯的區(qū)域異質(zhì)性和相似性（如發(fā)現(xiàn)Cor和Dien的GABA能神經(jīng)元亞群是高度相似的）。同時(shí)，本研究還揭示了Dien谷氨酸能神經(jīng)元和GABA能神經(jīng)元亞型存在顯著的背腹側(cè)分布差異。另外，研究人員將Cor興奮性神經(jīng)元進(jìn)一步細(xì)分為遷移神經(jīng)元、上層神經(jīng)元以及深層神經(jīng)元的多個(gè)亞型。通過可視化這些亞型，實(shí)現(xiàn)了在更廣的時(shí)間窗（GW8-GW16）內(nèi)觀察它們的時(shí)空變化特點(diǎn)。這些研究結(jié)果揭示了發(fā)育中的人腦神經(jīng)元亞型的時(shí)空動(dòng)態(tài)變化和區(qū)域多樣性。

為了探索人腦不同區(qū)域特定神經(jīng)元亞群的發(fā)育路徑，研究人員通過結(jié)合scRNA-seq和scStereo-seq數(shù)據(jù)，計(jì)算并重建了每個(gè)區(qū)域特定神經(jīng)元亞群的時(shí)空發(fā)育軌跡。其中，有趣的是，作者發(fā)現(xiàn)Dien RG-1趨向于向LHX6+ GABA能神經(jīng)元發(fā)育，而Dien RG-2趨向于向谷氨酸能神經(jīng)元發(fā)展。同時(shí)，空間可視化結(jié)果顯示，Dien RG-1和LHX6+ GABA能神經(jīng)元主要位于Dien腹側(cè)，而Dien RG-2和Dien谷氨酸能神經(jīng)元主要亞群（Glu-3）均主要位于Dien背側(cè)，這進(jìn)一步驗(yàn)證了單細(xì)胞數(shù)據(jù)分析的結(jié)果。上述研究結(jié)果有助于更好地理解異質(zhì)性RG細(xì)胞如何對(duì)神經(jīng)元的區(qū)域特化做出貢獻(xiàn)。根據(jù)差異表達(dá)基因和經(jīng)典標(biāo)記基因，研究人員接著將GW6-GW23期間不同腦區(qū)的少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞（OPC）和星形膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞（APC）分別分為六種和五種亞型，通過比較分析發(fā)現(xiàn)它們的腦區(qū)分子異質(zhì)性相對(duì)較小，但是，進(jìn)一步觀察發(fā)現(xiàn)這些亞型存在顯著的空間分布偏好。例如，研究人員發(fā)現(xiàn)在GW16時(shí)，Dien腹側(cè)中OPC和APC亞型的比例都高于Dien背側(cè)。通過受配體分析發(fā)現(xiàn)，這些空間偏好性的分布有助于促進(jìn)神經(jīng)元區(qū)域特化。

綜上所述，此項(xiàng)研究通過結(jié)合單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組和空間轉(zhuǎn)錄組首次刻畫多時(shí)間點(diǎn)、超大面積的人腦多個(gè)區(qū)域時(shí)空發(fā)育轉(zhuǎn)錄組圖譜，為了解人腦發(fā)育、神經(jīng)元的區(qū)域特化和相關(guān)疾病提供了寶貴的資源，這一突破為助力治療腦疾病提供了線索。同時(shí)，值得注意的是，這項(xiàng)研究標(biāo)志著在激烈的國際競爭中，中國科學(xué)家在人腦空間組學(xué)研究領(lǐng)域擠進(jìn)世界第一梯隊(duì)。

中國科學(xué)院動(dòng)物研究所焦建偉研究員、廣州國家實(shí)驗(yàn)室董驥研究員、北京大學(xué)杜鵬研究員和北京大學(xué)靳蕾副研究員為本文共同通訊作者。中國科學(xué)院動(dòng)物研究所博士后李妍昕、博士后李忠秋、廣州國家實(shí)驗(yàn)室助理研究員王長亮、北京大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院畢業(yè)博士生楊敏為本文的共同第一作者。王雁玲研究團(tuán)隊(duì)參與了項(xiàng)目協(xié)作。同時(shí)獲得了國家科技部、國家自然科學(xué)基金委、中國科學(xué)院先導(dǎo)等項(xiàng)目的資助。

研究方法亮點(diǎn)
這項(xiàng)工作刻畫了迄今為止跨時(shí)間點(diǎn)最廣、面積最大的人腦多區(qū)域時(shí)空發(fā)育轉(zhuǎn)錄組圖譜，研究用到了單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組和空間轉(zhuǎn)錄組等實(shí)驗(yàn)技術(shù)。

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文章原文鏈接：
https://doi.org/10.1016/j.cell.2023.11.016