如何利用Feyond-A400進行TRFIA檢測
一、癌胚抗原的由來
癌胚抗原( Carcinoembryonic antigen,CEA)是一種分子量為150,000-300,000道爾頓的糖蛋白。1965年首先由加拿大學(xué)者從結(jié)腸腺瘤和胎兒腸中提取的一種腫瘤相關(guān)抗原。主要存在于直腸,結(jié)腸癌組織和胚胎腸粘膜上。因這種抗原也存在于2~6個月胚胎的胃腸、肝臟和胰腺組織中,故名癌胚抗原,也稱胚胎抗原(EA)或胎兒抗原(FA)[1]。
二、癌胚抗原的臨床意義
人體血清中的CEA屬于廣譜腫瘤標(biāo)志物,其濃度與各臟器癌特別是結(jié)腸癌密切相關(guān),凡內(nèi)胚層來源的惡性腫瘤如結(jié)腸、直腸、食道、胃、肝和胰腺等的癌腫瘤病人血清中均有CEA存在, 并含量明顯高于非腫瘤病人[2]。腫瘤患者血清CEA水平與腫瘤的進展相關(guān),追蹤測定CEA有助于腫瘤術(shù)后觀察和對手術(shù)成敗的判斷。
三、癌胚抗原的檢測技術(shù)
用于檢測 CEA的方法已有酶聯(lián)免疫分析法(ELISA)、放射免疫分析法(RIA)、化學(xué)發(fā)光免疫分析法(CLIA)、電化學(xué)發(fā)光免疫分析法(ECLIA)和時間分辨熒光免疫分析法(TRFIA)。TRFIA是20世紀(jì)80年代迅速發(fā)展起來的一種公認最有前途的非放射性免疫標(biāo)記技術(shù)[3],TRFIA具有靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性好、測定范圍寬和非放射性等優(yōu)點。
奧盛Feyond-A400多功能酶標(biāo)儀是在Feyond-A300的基礎(chǔ)上新增TRF檢測功能,可實現(xiàn)對TRFIA類實驗的檢測。
四、材料
癌胚抗原測定試劑盒(廣州達瑞)
Feyond-A400多功能酶標(biāo)儀
五、方法
. 標(biāo)品配方
配制CEA標(biāo)準(zhǔn)品,濃度分別為 1、5、10、100、560 ng/mL。
儀器參數(shù)設(shè)置
試劑波長 |
EX/EM:365/612 |
PMT增益 |
中高 |
穩(wěn)定時間 |
150ms |
積分時間 |
40μs |
TRF延遲 |
100μs |
圖1. 基本參數(shù)設(shè)置
六、結(jié)果
. 分析參數(shù)
曲線擬合方式 |
樣條函數(shù) |
X軸 |
LOG |
Y軸 |
LOG-B |
Feyond-A400內(nèi)置的數(shù)據(jù)處理軟件可直接將CEA標(biāo)準(zhǔn)品濃度與熒光強度進行標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合,利用三次樣條擬合方式得出曲線。
圖2. 儀器生成的CEA標(biāo)準(zhǔn)曲線
圖3. 標(biāo)品反算濃度
與通常的熒光免疫分析法相比,TRFIA可有效避免本底熒光的干擾,大大提高檢測的靈敏度和準(zhǔn)確性,已廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、食品檢測、和獸藥殘留檢測等領(lǐng)域。而Feyond-A400的TRF檢測功能可實現(xiàn)TRFIA相關(guān)應(yīng)用的檢測。
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參考文獻
[1]史蕓,王振軍,王斌.癌胚抗原與臨床疾病的關(guān)系研究進展[J].中國醫(yī)師雜志, 2005(S1):4.DOI:CNKI:SUN:DDYS.0.2005-S1-341.
[2]李偶連,劉翠,童艷麗,等.癌胚抗原(CEA)檢測技術(shù)的研究進展[J].分子診斷與治療雜志, 2008, 20(002):48-51.
[3]喬艷紅,谷澤亮,張湔,等.乙肝病毒表面抗體TRFIA方法的建立及其應(yīng)用[J].標(biāo)記免疫分析與臨床,2007,14(1):3.DOI:10.39
69/j.issn.1006-1703.2007.01.009.
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