基因醫(yī)療臨床試驗載體使用情況

截止2023年1月，與此相關(guān)的全球上市細(xì)胞與基因治療產(chǎn)品共計26項，慢病毒載體8項，腺相關(guān)病毒6項，腺病毒6項，逆轉(zhuǎn)錄病毒3項，單純皰疹病毒2項，�？刹《�1項。臨床項目中，以AAV為載體的基因治療試驗數(shù)量呈現(xiàn)迅猛增長之勢，在 ClinicalTrials.gov登記的以AAV為載體的基因治療臨床試驗從2016年的不足10個增至2018年11月的145個，再到2022年6月進(jìn)一步提升至 239個。

病毒載體生產(chǎn)工藝

病毒載體生產(chǎn)需要穩(wěn)健的工藝流程，且工藝可進(jìn)行全面放大并符合法規(guī)要求。

上游工藝是得到數(shù)量充足，包裝完整病毒顆粒的過程，常見細(xì)胞主要有3種：基于人胚胎腎細(xì)胞HEK293的三質(zhì)粒轉(zhuǎn)染系統(tǒng)；基于夜蛾昆蟲細(xì)胞(Sf9)的桿狀病毒表達(dá)載體系統(tǒng)；哺乳動物穩(wěn)定細(xì)胞系等。細(xì)胞復(fù)蘇和DMSO去除后進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)階段，通過控制pH，DO，培養(yǎng)溫度等參數(shù)在培養(yǎng)基體系內(nèi)得到適宜密度的細(xì)胞。在質(zhì)粒轉(zhuǎn)染階段，控制質(zhì)粒總量，轉(zhuǎn)染試劑/質(zhì)粒質(zhì)量比，細(xì)胞密度等相關(guān)工藝參數(shù)，在完成病毒包裝后進(jìn)行收獲。

下游工藝是去除雜質(zhì)和病毒載體濃縮，由于每種載體產(chǎn)品的特性不同，例如空殼/完整衣殼比例，滴度，吸附特性，聚集特性等，不可能開發(fā)一種通用工藝。典型步驟：細(xì)胞收獲液裂解后經(jīng)澄清去除細(xì)胞碎片和顆粒物類雜質(zhì)，需要考慮過濾器孔徑，載量，流速的參數(shù)，核酸酶消化進(jìn)行酶切反應(yīng)以去除宿主DNA或轉(zhuǎn)染殘留的質(zhì)粒DNA，由于上游收獲的體積較大，通過超濾濃縮減少工作體積，并且要防止產(chǎn)物聚集；病毒載體在層析階段可能用到離子交換層析，親和層析或凝膠層析，需要充分考慮目標(biāo)產(chǎn)品的特性進(jìn)行工藝選擇；最后超濾再進(jìn)行濃縮換液，除菌過濾和灌裝。