木質(zhì)素含量檢測試劑盒微量檢測方法
瀏覽次數(shù):1263 發(fā)布日期:2021-8-11
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產(chǎn)品內(nèi)容:
試劑一:液體 34mL×1 瓶,4℃保存。每次用完用封口膜密封保存。試劑二:液體 30mL×1 瓶,4℃保存。
微量法
標(biāo)準(zhǔn)品:粉劑×1 支,50mg 木質(zhì)素,4℃保存。臨用前加入 1mL 高氯酸,充分混勻溶解,配成50mg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)液。
產(chǎn)品說明:
木質(zhì)素是構(gòu)成植物細(xì)胞壁的成分之一,具有使細(xì)胞相連的作用。木質(zhì)素存在于木質(zhì)組織中,主要作用是通過形成交織網(wǎng)來硬化細(xì)胞壁,為次生壁主要成分。
木質(zhì)素中的酚羥基發(fā)生乙酰化后在 280nm 處有特征吸收峰,280nm 的吸光值高低與木質(zhì)素含量正相關(guān)。
試驗中所需的儀器和試劑:
紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機、水浴鍋、微量石英比色皿/96 孔 UV 板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、玻璃管、封口膜、高氯酸、冰乙酸和蒸餾水。
操作步驟:
一、樣品處理:
樣品 80℃烘干至恒重,粉碎,過 40 目篩,稱取約 3mg 于 1.5mLEP 管中。
二、測定步驟:
1、分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長至 280nm,冰乙酸調(diào)零。
2、操作表:在玻璃管中依次加入下列試劑:
|
測定管 |
標(biāo)準(zhǔn)管 |
空白管 |
樣品(mg) |
3 |
- |
- |
試劑一(µL) |
300 |
300 |
300 |
高氯酸(µL) |
12 |
- |
12 |
標(biāo)準(zhǔn)液(µL) |
- |
12 |
- |
封口膜密封,充分混勻。于 80℃水浴鍋水浴 40min,進行乙;C扛 10min 震蕩一次,
然后自然冷卻。 |
試劑二(µL) |
300 |
300 |
300 |
充分混勻后于常溫 8000g 離心 10min,取上清。 |
上清液(µL) |
12 |
12 |
12 |
冰乙酸(µL) |
588 |
588 |
588 |
測定 280nm 下的吸光值 A,記為 A 測定管、A 空白管、A 標(biāo)準(zhǔn)管,計算△A=A 測定管-A 空白管、△A 標(biāo)準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管。 |
三、木質(zhì)素含量計算:
C 標(biāo)準(zhǔn)=C 原液×V 標(biāo)準(zhǔn)÷V 乙酰化×V 上清÷V 檢測=0.0196 mg/mL
木質(zhì)素(mg/g)= △A÷(△A 標(biāo)準(zhǔn)÷C 標(biāo)準(zhǔn))×V 檢測÷(W×V 上清÷V 乙;
= 0.5998×△A÷△A 標(biāo)準(zhǔn)÷W
C 標(biāo)準(zhǔn):標(biāo)準(zhǔn)液在最終檢測體系中的濃度,0.0196 mg/mL;C 原液:標(biāo)準(zhǔn)液濃度,50mg/mL;V 標(biāo)準(zhǔn):加入的標(biāo)準(zhǔn)液的體積,0.012mL;V 乙;阂阴;磻(yīng)體積,0.612mL;V 上清:上清液體積,0.012mL;V 檢測:檢測反應(yīng)總體積,0.6mL;W:樣本質(zhì)量,g。