乙�；鞍卓焖贆z測和定量
瀏覽次數(shù)：6520 發(fā)布日期：2018-7-11
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用乙�；贵w填料及HRP標(biāo)記乙�；贵w快速檢測和定量細(xì)胞總乙酰化蛋白
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一、IP-ELISA聯(lián)合方法原理及流程：
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方法原理及流程說明：
1） 從實驗組和對照組的細(xì)胞中分別取400ug粗蛋白，每組用10微升抗乙�；贵w瓊脂糖填料(ICP0388)富集（IP）。
2） 結(jié)合于瓊脂糖填料上的乙�；鞍酌看斡�100uL 0.1 mol/L HCl，洗脫兩次。
3） 將洗脫液匯集在一起，用飽和碳酸鈉調(diào)節(jié)pH值至中性。
4） 然后取洗脫液100uL/孔包被于酶標(biāo)板上，重復(fù)包被兩孔，在室溫下培養(yǎng)過夜。
5） 第二天用PBSt清洗板孔2次，用0.1%BSA inPBSt封閉板孔，孵育30分鐘，再用PBSt洗滌三次。
5） 在37℃下添加HRP標(biāo)記的抗乙酰化抗體（ICP0381）用0.1%BSA in PBSt稀釋到0.25 ug/Ml,孵育30分鐘。
6） 用PBSt清洗板孔4次，每孔加100uL TMB，培養(yǎng)30分鐘顯色。
7）每孔10 uL 2 mol/L 硫酸終止顯色。在450 nm處讀取吸光度（OD）。
8） 通過OD（處理）/OD（未處理）計算反應(yīng)性乙酰化蛋白水平。
實例1：分析用不同濃度的TSA處理12小時的細(xì)胞中的總乙�；鞍姿�。即先用抗AcK瓊脂糖填料（ICP038）富集IP,再以ELISA方法用HRP標(biāo)記的抗乙酰化抗體（ICP0381）做檢測不同濃度TSA處理的細(xì)胞中，快速檢測出其蛋白質(zhì)乙酰化增加達(dá)10倍。
實例2：分別用HDAC抑制劑TSA處理5和15小時后，對MMRU細(xì)胞樣品中的乙�；鞍踪|(zhì)進行Western blot分析。即樣品先用抗乙�；嚢彼岘傊翘盍希↖CP0388）親和富集（IP），再用WB方法，加入HRP標(biāo)記的抗乙酰化抗體（ICP0381）進行檢測，快速得到高確定性的WB結(jié)果。
三、快速檢測乙�；鞍姿玫降南嚓P(guān)抗體試劑
| 試劑中文名稱 |
試劑英文名稱 |
貨號 |
使用范圍 |
規(guī)格 |
| 抗乙酰賴氨酸抗體瓊脂糖填料 |
Acetyl Lysine Antibody, Agarose |
ICP0388-2mg
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IP |
2mg |
| 抗乙酰賴氨酸抗體瓊脂糖填料 |
Acetyl Lysine Antibody, Agarose |
ICP0388-5mg
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IP |
5mg |
| HRP標(biāo)記抗乙酰賴氨酸抗體 |
Acetyl Lysine Antibody, HRP |
ICP0381 |
ELISA, WB |
100ug
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| FITC標(biāo)記抗乙酰賴氨酸抗體 |
Acetyl Lysine Antibody, FITC |
ICP0385 |
IF |
100ug
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| 生物素標(biāo)記抗乙酰賴氨酸抗體 |
Acetyl Lysine Antibody, Biotin |
ICP0383 |
ELISA, WB，IHC |
100ug
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| 抗乙酰賴氨酸抗體（多克隆） |
Acetyl Lysine Antibody |
ICP0380 |
ELISA, WB，IHC,IF |
100ug
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| 抗乙酰賴氨酸抗體（單克�。� |
Acetyl Lysine Antibody，Mouse Monoclonal |
ICP0390 |
ELISA, WB，IHC,IF |
100ug
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| 乙�；鞍着悸�(lián)物 |
Acetylated BSA |
ICP6090 |
ELISA，competitive inhibitor |
5mg |
