MTT溶液的配制方法
通常MTT濃度為5mg/ml。因此,可以稱取MTT 0.5克,溶于100 ml的磷酸緩沖液(PBS)或無(wú)酚紅的培養(yǎng)基中,用0.22μm濾膜過(guò)濾以除去溶液里的細(xì)菌,放4℃ 避光保存即可。在配制和保存的過(guò)程中,容器最好用鋁箔紙包住。
需要注意的是,MTT法只能用來(lái)檢測(cè)細(xì)胞相對(duì)數(shù)和相對(duì)活力,但不能測(cè)定細(xì)胞絕對(duì)數(shù)。在用酶標(biāo)儀檢測(cè)結(jié)果的時(shí)候,為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的線性,MTT 吸光度最好在0-0.7 范圍內(nèi)。
MTT一般最好現(xiàn)用現(xiàn)配,過(guò)濾后4℃避光保存兩周內(nèi)有效,或配制成5mg/ml保存在-20度長(zhǎng)期保存,避免反復(fù)凍融,最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光以免分解。我一般都把MTT粉分裝在EP管里,用的時(shí)候現(xiàn)配,直接往培養(yǎng)板中加,沒(méi)必要一下子配那么多,尤其當(dāng)MTT變?yōu)榛揖G色時(shí)就絕對(duì)不能再用了。
MTT有致癌性,用的時(shí)候小心,有條件最好帶那種透明的簿膜手套。配成的MTT需要無(wú)菌,MTT對(duì)菌很敏感;往96孔板加時(shí)不避光也沒(méi)有關(guān)系,畢竟時(shí)間較短,或者你不放心的時(shí)候可以把操作臺(tái)上的照明燈關(guān)掉。配制MTT時(shí)用用PBS溶解,也有人用生理鹽水配,60℃水浴助溶。
PBS配制方法:Nacl 8g、Kcl 0.2g、Na2HPO4 1.44g、KH2PO4 0.24g,調(diào)pH 7.4,定容1L。