​根據(jù)美國疾病控制與預(yù)防中心(CDC)的數(shù)據(jù)，在2017年至2020年的250起多州食源性疫情中，沙門氏菌被確定為186例的主要原因。以前的研究發(fā)現(xiàn)，多種農(nóng)業(yè)做法是導(dǎo)致沙門氏菌爆發(fā)的污染源，包括使用動(dòng)物糞便作為肥料和被污染的灌溉用水。眾所周知，水是新鮮農(nóng)產(chǎn)品微生物污染的儲(chǔ)存庫，也是病原體傳播的載體。因此，了解水中血清型沙門氏菌的生存能力對(duì)減少其致病性傳播具有重要意義。

在這項(xiàng)研究中，評(píng)估了12種血清型腸沙門氏菌亞種的生存能力。使用納米流式細(xì)胞術(shù)（Apogee A50）在RAPID-B（一項(xiàng)專利技術(shù)）assay中和TSA (Tryptic Soy Agar)平板分別計(jì)數(shù)，在4℃和25℃無核酸酶的水中培養(yǎng)160天。結(jié)果表明在25°C培養(yǎng)時(shí)，在蒸餾水中培養(yǎng)160天后，Apogee納米流式儀分析所有12種血清型均保持活力，而傳統(tǒng)的平板計(jì)數(shù)未能檢測到10種血清型。此外，研究結(jié)果表明，4°C構(gòu)建了一個(gè)更有利的環(huán)境，沙門氏菌可以在沒有營養(yǎng)的情況下長時(shí)間存活。然而，在這種條件下，沙門氏菌對(duì)所有測試的抗生素和苯扎氯銨 (BZK)表現(xiàn)出更高的敏感性。這項(xiàng)研究提供了沙門氏菌在不同溫度下的長期生存能力，并強(qiáng)調(diào)需要強(qiáng)大的工具來檢測這種微生物，以降低通過無核酸酶的水傳播食源性病原體的風(fēng)險(xiǎn)。

通過連續(xù)的稀釋(100和10 CFU/mL)比較沙門氏菌，評(píng)估了納米流式細(xì)胞術(shù)檢測區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞的能力。在無核酸酶的水中，在4℃和25℃下保存150天的懸浮液（圖1）。

圖1：RAPID-B TPC法活/死細(xì)胞流式細(xì)胞圖:(A)空白;(B)在4°C條件下，稀釋10 CFU/mL，第150天;(C)在4°C下，稀釋100 CFU/mL，第150天;(D)在25°C條件下，稀釋10 CFU/mL，第150天;(E)在25°C下，稀釋100 CFU/mL，第150天

為了支持RAPID-B TPC測定，流式細(xì)胞術(shù)發(fā)現(xiàn)在兩種溫度下，所有沙-門-氏-菌-血清型在水中存活160天后，我們使用UP Broth和1/10 × TSB富集技術(shù)進(jìn)行復(fù)蘇步驟來評(píng)估恢復(fù)情況。在25°C保存的沙-門-氏-菌-血清型根據(jù)處理表現(xiàn)出不同的恢復(fù)模式。事實(shí)上，血清型S. Urbana、S. Dublin、S. Kentucky、S. Heidelberg和S. Enteritidis(分別為2、3、6、10和11)在通用預(yù)富集(UP)肉湯中沒有恢復(fù)(圖5A)。在4°C下，所有12種血清型在UP肉湯中培養(yǎng)過夜，并由克隆在TSA板上，均顯示生長(圖5B)。然而，使用富集技術(shù)，在4°C條件下，所有沙-門-氏-菌-血清型在TSA板和稀釋的TSA板上都恢復(fù)良好(圖5B,D)。相比之下，在1/10 × TSB中預(yù)富集24 h的12種血清型中，有11種在25°C和4°C條件下均在1/10 × TSA板上生長(圖5C)。1/10 × TSB未檢測鼠-傷-寒-沙-門-氏-菌-。

結(jié)論：經(jīng)RAPID-B流式細(xì)胞術(shù)分析，沙-門-氏-菌血清型可在無菌無核酸酶的水中存活160天以上。使用RAPID-B TPC檢測，在4°C水中保存160天后，分析的沙-門-氏-菌血清型數(shù)量減少，但仍高于25°C保存的相同血清型。為了確認(rèn)，用UP肉湯和1/10×TSB（）預(yù)先富集，在TSA（胰蛋白酶大豆瓊脂）中復(fù)蘇了所有篩選的血清型。沙-門-氏-菌-血清型顯示出細(xì)胞大小的減小，并改變了它們的代謝譜，以便在低營養(yǎng)或無營養(yǎng)的環(huán)境中存活更長的時(shí)間。在緊張的環(huán)境條件下，這種由RAPID-B流式細(xì)胞術(shù)可以測定的活細(xì)胞計(jì)數(shù)和檢測活躍生長的細(xì)胞，以及休眠和/或死亡細(xì)胞。在未來，RAPID-B基因檢測將被開發(fā)用于檢測特定的沙-門-氏-菌-血清型。

英國Apogee超靈敏納米流式分析儀，專為外泌體微囊泡（EVs）等小顆粒分析優(yōu)化設(shè)計(jì)，在EVs樣品顆粒大小分析，絕對(duì)定量，多標(biāo)記物同時(shí)快速分析工作中廣泛應(yīng)用。截止目前，該設(shè)備已累計(jì)參與數(shù)百篇高質(zhì)量同行審議文章相關(guān)實(shí)驗(yàn)分析工作。其出色的靈敏度，穩(wěn)定性及可靠性已備受業(yè)內(nèi)廣泛認(rèn)可，并將繼續(xù)為EVs相關(guān)基礎(chǔ)研究及轉(zhuǎn)化應(yīng)用提供堅(jiān)實(shí)支持。

Apogee納米流式除了可用于納米級(jí)別的顆粒 （如：細(xì)胞外囊泡、外泌體、微生物、病毒顆粒、LNP） 等，還可以用于作常規(guī)動(dòng)物細(xì)胞檢測 （如免疫細(xì)胞、哺乳類動(dòng)物細(xì)胞、等）。它是一臺(tái)全面且功能強(qiáng)大的納米流式分析儀！

 
參考文獻(xiàn)
A flow cytometric assay to detectviability and persistence ofSalmonella enterica subspenterica serotypes in nuclease-free water at 4 and25°C
Frontiers in Microbiology，TYPE Original Research
PUBLISHED 16 February 2024Do1 10.3389/fmicb.2024.1342478)Check for updates
OPEN ACCESS
EDITED BYPratik Banerjee,.University of lllinois at Urbana-Champaign.United States
REVIEWED BYMd Latiful Bari,.University of Dhaka, BangladeshAlexey V. Rakov.Central Research Institute of Epidemiology(CRIE), Russia
 

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