生物實(shí)驗(yàn)剛剛上手，緩沖液、培養(yǎng)基種類層出不窮，配方一個(gè)一個(gè)不好找？萌 CeCe 來(lái)幫您，本期是各類實(shí)驗(yàn)需要的配方分享！
 
01
微生物培養(yǎng)、富集相關(guān)
 

培養(yǎng)基，是指供給微生物或離體細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖的，由不同營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)按特定比例配置而成的混合物，為細(xì)胞提供適宜的生長(zhǎng)繁殖環(huán)境。

(1) 細(xì)菌培養(yǎng)基
 

 
(2) 真菌培養(yǎng)基

[1]：用于釀酒酵母可以加入后葡萄糖 115 ℃ 20 min 高溫滅菌，但用于畢赤酵母培養(yǎng)時(shí)建議將葡萄糖溶液過(guò)濾除菌后加入避免產(chǎn)生葡萄糖的高溫碳化。
 
培養(yǎng)基按其物理狀態(tài)可分為固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基三類。

• 固體培養(yǎng)基，是在液體培養(yǎng)基中加入凝固劑 (e.g. 瓊脂、明膠、硅膠) 而呈現(xiàn)固體狀態(tài)的一類培養(yǎng)基，一般凝固劑含量為 1.5%-2.0% (以瓊脂糖為例)，固體培養(yǎng)基通常用于微生物分離、鑒定、計(jì)數(shù)等。

• 半固體培養(yǎng)基，是在液體培養(yǎng)基中加入少量凝固劑而呈現(xiàn)半固體狀態(tài)的一類培養(yǎng)基，一般凝固劑的含量為 0.5%-0.8% (以瓊脂糖為例)，半固體培養(yǎng)基常用于觀察微生物的運(yùn)動(dòng)特征，鑒定菌種等。
• 液體培養(yǎng)基，不含有任何凝固劑，成分均勻，常用于大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)及在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行微生物的基礎(chǔ)理論研究。

 
表內(nèi)提供的大多為液體培養(yǎng)基配方，大家可以根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需求添加瓊脂配成固體或半固體培養(yǎng)基。另外正常配置的過(guò)程是不需要額外調(diào) pH 的，但如果發(fā)現(xiàn)生長(zhǎng)效率過(guò)低可以復(fù)查一下配置過(guò)程中是否 pH 有問(wèn)題哦~

02
質(zhì)粒構(gòu)建篩選相關(guān)

 
(1) 質(zhì)粒提取 

堿裂解法是目前質(zhì)粒提取最常用的一種方法，當(dāng)菌體在氫氧化鈉和 SDS 溶液中裂解時(shí)，蛋白質(zhì)與 DNA 發(fā)生變性，當(dāng)加入中和液后， 質(zhì)粒 DNA 分子能夠迅速?gòu)?fù)性，呈溶解狀態(tài)，離心時(shí)留在上清中；而蛋白質(zhì)與染色體 DNA 呈絮狀，可通過(guò)離心沉淀至管底。后續(xù)可對(duì)質(zhì)粒通過(guò)其他方式純化 (如乙醇沉淀法、柱式純化法)。

[2]：使用時(shí)需要額外加入 RNaseA (HY-129046) 溶液 。
[3]：溶解菌體時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)，顛倒混勻操作盡量輕柔。

(2) 質(zhì)粒篩選：抗生素溶液 

在質(zhì)粒篩選的過(guò)程中需要根據(jù)構(gòu)建質(zhì)粒的抗性選擇不同的抗生素溶液，下表列出了幾種較為常見的抗生素溶液的配置方法，建議配置后分裝保存，避免反復(fù)凍融影響篩選效果。另外提供抗生素溶液的配方都是儲(chǔ)存液的配方，使用的時(shí)候還要根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)的菌株、質(zhì)粒的具體篩選濃度稀釋成對(duì)應(yīng)的濃度使用哦~

[4]：用于藍(lán)白斑篩選的 X-Gal 應(yīng)為 X-α-Gal。
 
03
酶切連接相關(guān)

質(zhì)粒酶切實(shí)驗(yàn)之前有做過(guò)專題推文，小 M 在這里貼上之前整理的實(shí)驗(yàn)寶典~(詳見往期推文：科研小白的裝 X 寶典？限制性內(nèi)切酶實(shí)驗(yàn)大盤點(diǎn)！) 
 
04
核酸電泳相關(guān)

瓊脂糖凝膠電泳是一種常用的生物分子分離技術(shù)，利用瓊脂糖基質(zhì)形成的凝膠作為分離介質(zhì)，通過(guò)電場(chǎng)的作用使帶電的生物分子在凝膠中移動(dòng)，根據(jù)其大小和電荷的不同而分離。
 

[5]：TAE 緩沖液使用最為廣泛，適合大分子量 DNA 片段的分離，可用于 DNA 回收；TBE 緩沖液緩沖能力強(qiáng)，分辨率高于 TAE 體系，但緩沖液中的硼酸成分會(huì)影響 DNA 回收效率。
[6]：TBE 易析出，長(zhǎng)期保存建議以低濃度形式保存。
[7]：瓊脂糖膠的分辨率和膠濃度有關(guān)，膠濃度越高分辨率越高，相應(yīng)的濃度越高的瓊脂糖凝固也越快。

05
蛋白實(shí)驗(yàn)相關(guān)

(1) 蛋白裂解

[8]：DTT 低溫儲(chǔ)存容易析出，可 37 ℃ 水浴加熱或室溫放置一段時(shí)間至溶液充分溶解后使用。

 
(2) 蛋白電泳膠 

▐ Tris-Gly-SDS 體系：

• 濃縮膠配方：

• 分離膠配方：

 
▐ Tricine-SDS-PAGE 體系：

• 丙烯酰胺-雙丙烯酰胺 AB-3 (49.5% T，3%C Mixture)：48 g 丙烯酰胺、1.5 g 雙丙烯酰胺溶于 100 mL 超純水中。

• 丙烯酰胺-雙丙烯酰胺 AB-6 (49.5% T，6%C Mixture)：46.5 g 丙烯酰胺、3g 雙丙烯酰胺溶于 100 mL 超純水中 (用于分離分子量 ＜5Kda 的小蛋白或多肽)。

• Gel Buffer (3 ×): 7.266 g Tris、0.06 g SDS 溶于 20 mL 水，調(diào)節(jié) pH 至 8.45。

[9]：APS、TEMED 用于凝膠聚合，應(yīng)在澆注凝膠之前立即加入。
 
(3) 蛋白電泳緩沖液 

蛋白電泳緩沖液需要根據(jù)凝膠體系來(lái)進(jìn)行選擇。凝膠系統(tǒng)為 Tris-Gly 體系時(shí)，可選擇 Tris-Gly 電泳緩沖液，凝膠系統(tǒng)為 Bis-Tris 體系時(shí)，可選擇 MES 或 MOPS 緩沖液，當(dāng)凝膠系統(tǒng)為 Tris-tricine 體系時(shí)，則選擇 Tricine 緩沖液。

并且，蛋白電泳緩沖液分為變性與非變性緩沖液，區(qū)別在于變性緩沖液需加入 SDS 中和電荷。我們通常研究 WB、IP 時(shí)，使用變性緩沖液研究分子量大小即可，非變性緩沖液常用于研究蛋白空間結(jié)構(gòu)、等電點(diǎn)等，小 M 這里給大家提供的是幾種電泳體系中變性緩沖液的配方哦~
 

 
(4) 染色、脫色液

 
(5) 轉(zhuǎn)膜、封閉液

 
(6) 蛋白定量 

蛋白定量最常使用的方法是比色法，通過(guò)蛋白與某些顯色試劑反應(yīng)后產(chǎn)生顏色，并利用顏色的強(qiáng)度和蛋白質(zhì)濃度成正比的原理進(jìn)行定量，常用的比色法包括：Lowry 法、BCA 法、Bradford 法等。

  
(7) 其他常用緩沖液


 
06
小結(jié)

本期小 M 為大家匯總了實(shí)驗(yàn)中所用到的各類溶液配制方法，需要的小伙伴快快關(guān)注收藏喔~
 

產(chǎn)品推薦

HY-W133898 Tryptone

HY-153126 Yeast extract

HY-W019876 Ammonium persulfate, suitable for electrophoresis, 98%

HY-Y0997 N,N,N',N'-Tetramethylethylenediamine, for electrophoresis, 99%

HY-Y0316B‍ Sodium dodecyl sulfate for electrophoresis

HY-D0847‍ Acrylamide, suitable for electrophoresis, 99%

HY-D0848 N,N'-Methylenebisacrylamide

HY-D0227‍ THAM (Tris)

HY-Y0682‍ Ethylenediaminetetraacetic acid

HY-D0857‍ HEPES