生化試劑盒使用中的常見問題及其解答
生化試劑盒可分為液體單試劑和液體雙試劑，前者特別適用于半自動(dòng)生化分析儀和小型自動(dòng)生化分析儀，使用方便，缺點(diǎn)是穩(wěn)定性較差。與單試劑相比，雙試劑提高了抗干擾能力，具有穩(wěn)定性能較好，可消除樣品自身空白等特點(diǎn)。此外還有多項(xiàng)同測組合試劑、濃縮試劑等。
1. 生化試劑盒的測定原理？
生化試劑盒通過化學(xué)反應(yīng)/酶促反應(yīng)或物質(zhì)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)測定樣本中物質(zhì)含量或酶活；所用儀器一般為分光光度計(jì)和酶標(biāo)儀，兩者的測定原理都是 朗伯比耳定律: A=kbc，即當(dāng)適當(dāng)波長的一束平行單色光照射固定濃度均勻溶液時(shí)，其吸光度與光通過的液層厚度成正比。土壤、水質(zhì)、動(dòng)植物組織、血清、細(xì)胞細(xì)菌、食品等 樣本均可以進(jìn)行測定。
2. 如何選擇不同規(guī)格的試劑盒？
首先根據(jù)本實(shí)驗(yàn)的實(shí)際情況選擇，實(shí)驗(yàn)室有酶標(biāo)儀的且有該檢測波長的可以選擇微量法試劑盒；實(shí)驗(yàn)室有分光光度計(jì)的，且有相應(yīng)規(guī)格的比色皿既 可以選擇常量法也可選擇微量法試劑盒。建議購買前先閱讀官網(wǎng)的說明書，對其中自備的儀器和試劑進(jìn)行確認(rèn)。
3. 收到試劑盒后如何保存？
如果收到試劑盒，暫時(shí)不用，可按照外包裝上指示的溫度統(tǒng)一保存；拆開包裝后，請按照每個(gè)試劑的保存溫度進(jìn)行保存，有些試劑忌反復(fù)凍融； 有些試劑為粉劑，溶解之后性質(zhì)不穩(wěn)定。
4. 試劑盒的有效期是多長？
一般生化試劑盒有效期為6個(gè)月，也有特殊貨號生化試劑盒有效期為1年；具體以實(shí)際收到貨物的標(biāo)簽信息為準(zhǔn)。
5. 收到試劑盒后應(yīng)該從哪一步做起？
強(qiáng)烈建議客戶先拿出2-3個(gè)預(yù)期結(jié)果差別較大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。在實(shí)驗(yàn)的過程中，首先將試劑盒中的說明書通讀一遍， 檢查試劑盒中各成分的量與說明書符不符合，溶解或使部分試劑回復(fù)至室溫，然后處理樣本，樣本提取完成后，再溶解一些粉劑，開始實(shí)驗(yàn)。
6. 買了多個(gè)試劑盒，樣本只有很少可以只用一種提取液提取嗎？
一般同一個(gè)系列的試劑盒中，酶活測定的提取液類似，含量測定的提取液類似。但具體的請具體查詢。
7. 待測樣本必須是鮮樣的嗎？冷凍樣本是否可以用？
新鮮樣本和冷凍樣本都可用于大多數(shù)指標(biāo)的測定，有一些生理活性物質(zhì)容易降解，建議用新鮮樣本測定， 如輔酶Ⅰ、輔酶Ⅱ、谷胱甘肽、線粒體復(fù)合體等。冷凍樣本建議在-70℃或者液氮中保存。一般樣本在4度能都 保存一周，-20保存一個(gè)月，-80保存3個(gè)月
8. 土壤酶活性測定可以用鮮土嗎？
由于土壤顆粒大小不一致導(dǎo)致水分含量不一樣，且取樣量較少，為了保證測定的重復(fù)性，建議將鮮土風(fēng)干并 過篩后取樣。若用鮮土測定，需保證樣本的顆粒大小一致水分含量相似，建議過40目篩后取樣，且同時(shí)測定 的樣本要保持一致，最好不要一組樣本用風(fēng)干土，一組用鮮土，風(fēng)干后的土樣在-20保存1個(gè)月測定大部分酶活 幾乎不會有損失；某些土壤的成分如硝態(tài)氮、銨態(tài)氮等在風(fēng)干過程中會發(fā)生顯著變化，必須用新鮮樣品進(jìn)行分析。
9. 樣本研磨的方法？
樣本研磨我們一般用到三種方法：
第一種：將研缽置于冰盒上勻漿即冰浴勻漿，在勻漿的過程中注意勻漿器浸于冰中，防止因?yàn)槟Σ烈鸬臏囟冗^高，提取液可以在勻漿過程中或者勻漿后加入。
第二種：用液氮?jiǎng)驖{，液氮研磨前將樣本洗凈，盡量剪成小塊，放入研缽中，加入液氮研磨，液氮揮散后盡快加入第二次液氮直至研磨成粉末狀，避免其過程中 反復(fù)凍融，同時(shí)要做好保護(hù)措施，防止凍傷手指。完成后將粉末收集到離心管中加入緩沖液。樣本可以提前稱量號也可研磨完后稱量。
第三種：使用勻漿機(jī)進(jìn)行勻漿，將稱好的組織放入離心管中，加入適量提取液，加入鋼珠。并將模塊提前遇冷，按照機(jī)器指示進(jìn)行操作。一般的動(dòng)物組織用 該方法效果尚可，有些機(jī)器對植物組織的處理效果不好。
10. 測定前是如何調(diào)零？
使用分光光度計(jì)的用戶，用蒸餾水或相應(yīng)的有機(jī)試劑直接調(diào)零。使用酶標(biāo)儀的用戶，可以在一個(gè)孔里加入200μL的蒸餾水或去離子水，作為調(diào)零孔， 也可不用調(diào)零，后續(xù)計(jì)算中會有空白孔。
11. 樣本如何稀釋或濃縮？
樣本測定值若超出檢測范圍，可以將提取的上清液用提取液稀釋后重新測定。一般從高到低，按照2倍，5倍，10倍，20倍的順序，選擇一個(gè)合適的稀釋 倍數(shù)。樣本測定值若低于檢測范圍，可以提高樣本濃度，如稱取0.2g樣本加入1mL提取液勻漿，相當(dāng)于將樣本濃縮2倍。
12. 如何保證測定溫度？
（1）、根據(jù)說明書中指定測定溫度，提前打開保溫設(shè)備（如水浴鍋），設(shè)到指定溫度，在達(dá)到指定溫度后，把冷藏的試劑轉(zhuǎn)移到保溫設(shè)備中保溫10-30分鐘以上，以保證反應(yīng)一開始，就在指定溫度中進(jìn)行。
（2）、對于擁有酶標(biāo)儀的用戶，直接提前預(yù)熱，在達(dá)到設(shè)定溫度后，可以直接把預(yù)熱后的試劑，加入酶標(biāo)板，然后開始反應(yīng)。
（3）、在保溫設(shè)備（水浴鍋和金屬浴，最好是前者）進(jìn)行。注意提前對保溫設(shè)備進(jìn)行預(yù)熱，達(dá)到設(shè)定溫度后再進(jìn)行反應(yīng)。但是僅適用于能夠終止的反應(yīng)。
（4）、對于瞬間完成的反應(yīng)，或者對溫度不敏感的反應(yīng)，為了提高重復(fù)性，最好在同一溫度下完成檢測。例如打開空調(diào)，設(shè)定在室溫，如25℃。 當(dāng)然，所有控溫設(shè)備，都要進(jìn)行預(yù)熱。
13. 試劑盒有哪些常見規(guī)格？
（1）、50管的試劑盒，常量法試劑盒，用分光光度計(jì)檢測。1mL的比色皿檢測。
（2）、100管的試劑盒，微量法試劑盒，用酶標(biāo)儀（酶標(biāo)板）或者分光光度計(jì)（0.25 mL比色皿）檢測。
14. 試劑盒規(guī)格中是什么意思？
（1）、50T/48S：50T指能夠做50次測定，48S指可以測試48個(gè)樣品。如果每個(gè)樣品重復(fù)測定3次，那么只能測定16個(gè)樣品。其中有2次測定用于空白管或者 對照管。值得特別注意的是，50T/24S中由于每個(gè)樣品測定都需要做對照，因此能夠測定樣品的數(shù)量僅為8個(gè)（假設(shè)做3次重復(fù)）
（2）、100T/96S：100T指能夠做100次測定，96S指可以測定96個(gè)樣品，如果每個(gè)樣品重復(fù)測定3次，那么只能測定32個(gè)樣品。其中有4次測定用于空白管或 者對照管。 注意由于瓶璧和移液器吸附等，通常要比理論測定次數(shù)少1~3次。其它規(guī)格的含義依次類推。值得特別注意的是，100T/48S中由于每個(gè)樣品測 定都需要做對照，因此能夠測定樣品的數(shù)量僅為16個(gè)（假設(shè)做3次重復(fù)）。
15. 試劑盒中含有干粉的試劑應(yīng)該怎么稀釋保存？
一般試劑為粉劑的，可能更多的考慮到配成溶液后的穩(wěn)定性差，如NADH，或者和其他試劑溶解在一起會在不同的溫度下有其他的化學(xué)反應(yīng)如氯化錳。 -20℃保存的粉劑建議溶解后分裝保存，避免反復(fù)凍融。
1. 生化試劑盒的測定原理？
生化試劑盒通過化學(xué)反應(yīng)/酶促反應(yīng)或物質(zhì)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)測定樣本中物質(zhì)含量或酶活；所用儀器一般為分光光度計(jì)和酶標(biāo)儀，兩者的測定原理都是 朗伯比耳定律: A=kbc，即當(dāng)適當(dāng)波長的一束平行單色光照射固定濃度均勻溶液時(shí)，其吸光度與光通過的液層厚度成正比。土壤、水質(zhì)、動(dòng)植物組織、血清、細(xì)胞細(xì)菌、食品等 樣本均可以進(jìn)行測定。
2. 如何選擇不同規(guī)格的試劑盒？
首先根據(jù)本實(shí)驗(yàn)的實(shí)際情況選擇，實(shí)驗(yàn)室有酶標(biāo)儀的且有該檢測波長的可以選擇微量法試劑盒；實(shí)驗(yàn)室有分光光度計(jì)的，且有相應(yīng)規(guī)格的比色皿既 可以選擇常量法也可選擇微量法試劑盒。建議購買前先閱讀官網(wǎng)的說明書，對其中自備的儀器和試劑進(jìn)行確認(rèn)。
3. 收到試劑盒后如何保存？
如果收到試劑盒，暫時(shí)不用，可按照外包裝上指示的溫度統(tǒng)一保存；拆開包裝后，請按照每個(gè)試劑的保存溫度進(jìn)行保存，有些試劑忌反復(fù)凍融； 有些試劑為粉劑，溶解之后性質(zhì)不穩(wěn)定。
4. 試劑盒的有效期是多長？
一般生化試劑盒有效期為6個(gè)月，也有特殊貨號生化試劑盒有效期為1年；具體以實(shí)際收到貨物的標(biāo)簽信息為準(zhǔn)。
5. 收到試劑盒后應(yīng)該從哪一步做起？
強(qiáng)烈建議客戶先拿出2-3個(gè)預(yù)期結(jié)果差別較大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。在實(shí)驗(yàn)的過程中，首先將試劑盒中的說明書通讀一遍， 檢查試劑盒中各成分的量與說明書符不符合，溶解或使部分試劑回復(fù)至室溫，然后處理樣本，樣本提取完成后，再溶解一些粉劑，開始實(shí)驗(yàn)。
6. 買了多個(gè)試劑盒，樣本只有很少可以只用一種提取液提取嗎？
一般同一個(gè)系列的試劑盒中，酶活測定的提取液類似，含量測定的提取液類似。但具體的請具體查詢。
7. 待測樣本必須是鮮樣的嗎？冷凍樣本是否可以用？
新鮮樣本和冷凍樣本都可用于大多數(shù)指標(biāo)的測定，有一些生理活性物質(zhì)容易降解，建議用新鮮樣本測定， 如輔酶Ⅰ、輔酶Ⅱ、谷胱甘肽、線粒體復(fù)合體等。冷凍樣本建議在-70℃或者液氮中保存。一般樣本在4度能都 保存一周，-20保存一個(gè)月，-80保存3個(gè)月
8. 土壤酶活性測定可以用鮮土嗎？
由于土壤顆粒大小不一致導(dǎo)致水分含量不一樣，且取樣量較少，為了保證測定的重復(fù)性，建議將鮮土風(fēng)干并 過篩后取樣。若用鮮土測定，需保證樣本的顆粒大小一致水分含量相似，建議過40目篩后取樣，且同時(shí)測定 的樣本要保持一致，最好不要一組樣本用風(fēng)干土，一組用鮮土，風(fēng)干后的土樣在-20保存1個(gè)月測定大部分酶活 幾乎不會有損失；某些土壤的成分如硝態(tài)氮、銨態(tài)氮等在風(fēng)干過程中會發(fā)生顯著變化，必須用新鮮樣品進(jìn)行分析。
9. 樣本研磨的方法？
樣本研磨我們一般用到三種方法：
第一種：將研缽置于冰盒上勻漿即冰浴勻漿，在勻漿的過程中注意勻漿器浸于冰中，防止因?yàn)槟Σ烈鸬臏囟冗^高，提取液可以在勻漿過程中或者勻漿后加入。
第二種：用液氮?jiǎng)驖{，液氮研磨前將樣本洗凈，盡量剪成小塊，放入研缽中，加入液氮研磨，液氮揮散后盡快加入第二次液氮直至研磨成粉末狀，避免其過程中 反復(fù)凍融，同時(shí)要做好保護(hù)措施，防止凍傷手指。完成后將粉末收集到離心管中加入緩沖液。樣本可以提前稱量號也可研磨完后稱量。
第三種：使用勻漿機(jī)進(jìn)行勻漿，將稱好的組織放入離心管中，加入適量提取液，加入鋼珠。并將模塊提前遇冷，按照機(jī)器指示進(jìn)行操作。一般的動(dòng)物組織用 該方法效果尚可，有些機(jī)器對植物組織的處理效果不好。
10. 測定前是如何調(diào)零？
使用分光光度計(jì)的用戶，用蒸餾水或相應(yīng)的有機(jī)試劑直接調(diào)零。使用酶標(biāo)儀的用戶，可以在一個(gè)孔里加入200μL的蒸餾水或去離子水，作為調(diào)零孔， 也可不用調(diào)零，后續(xù)計(jì)算中會有空白孔。
11. 樣本如何稀釋或濃縮？
樣本測定值若超出檢測范圍，可以將提取的上清液用提取液稀釋后重新測定。一般從高到低，按照2倍，5倍，10倍，20倍的順序，選擇一個(gè)合適的稀釋 倍數(shù)。樣本測定值若低于檢測范圍，可以提高樣本濃度，如稱取0.2g樣本加入1mL提取液勻漿，相當(dāng)于將樣本濃縮2倍。
12. 如何保證測定溫度？
（1）、根據(jù)說明書中指定測定溫度，提前打開保溫設(shè)備（如水浴鍋），設(shè)到指定溫度，在達(dá)到指定溫度后，把冷藏的試劑轉(zhuǎn)移到保溫設(shè)備中保溫10-30分鐘以上，以保證反應(yīng)一開始，就在指定溫度中進(jìn)行。
（2）、對于擁有酶標(biāo)儀的用戶，直接提前預(yù)熱，在達(dá)到設(shè)定溫度后，可以直接把預(yù)熱后的試劑，加入酶標(biāo)板，然后開始反應(yīng)。
（3）、在保溫設(shè)備（水浴鍋和金屬浴，最好是前者）進(jìn)行。注意提前對保溫設(shè)備進(jìn)行預(yù)熱，達(dá)到設(shè)定溫度后再進(jìn)行反應(yīng)。但是僅適用于能夠終止的反應(yīng)。
（4）、對于瞬間完成的反應(yīng)，或者對溫度不敏感的反應(yīng)，為了提高重復(fù)性，最好在同一溫度下完成檢測。例如打開空調(diào)，設(shè)定在室溫，如25℃。 當(dāng)然，所有控溫設(shè)備，都要進(jìn)行預(yù)熱。
13. 試劑盒有哪些常見規(guī)格？
（1）、50管的試劑盒，常量法試劑盒，用分光光度計(jì)檢測。1mL的比色皿檢測。
（2）、100管的試劑盒，微量法試劑盒，用酶標(biāo)儀（酶標(biāo)板）或者分光光度計(jì)（0.25 mL比色皿）檢測。
14. 試劑盒規(guī)格中是什么意思？
（1）、50T/48S：50T指能夠做50次測定，48S指可以測試48個(gè)樣品。如果每個(gè)樣品重復(fù)測定3次，那么只能測定16個(gè)樣品。其中有2次測定用于空白管或者 對照管。值得特別注意的是，50T/24S中由于每個(gè)樣品測定都需要做對照，因此能夠測定樣品的數(shù)量僅為8個(gè)（假設(shè)做3次重復(fù)）
（2）、100T/96S：100T指能夠做100次測定，96S指可以測定96個(gè)樣品，如果每個(gè)樣品重復(fù)測定3次，那么只能測定32個(gè)樣品。其中有4次測定用于空白管或 者對照管。 注意由于瓶璧和移液器吸附等，通常要比理論測定次數(shù)少1~3次。其它規(guī)格的含義依次類推。值得特別注意的是，100T/48S中由于每個(gè)樣品測 定都需要做對照，因此能夠測定樣品的數(shù)量僅為16個(gè)（假設(shè)做3次重復(fù)）。
15. 試劑盒中含有干粉的試劑應(yīng)該怎么稀釋保存？
一般試劑為粉劑的，可能更多的考慮到配成溶液后的穩(wěn)定性差，如NADH，或者和其他試劑溶解在一起會在不同的溫度下有其他的化學(xué)反應(yīng)如氯化錳。 -20℃保存的粉劑建議溶解后分裝保存，避免反復(fù)凍融。
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