圖 1. 磁珠的基本結(jié)構(gòu)[5]。
圖 2. 磁珠電鏡結(jié)構(gòu)圖。
磁珠的特點
表 1. 磁珠的特點、應(yīng)用及優(yōu)勢。
02
圖 3. 磁珠法核酸分離純化示意圖。
免疫沉淀 (IP)
利用磁珠表面的功能化抗體或配體與目標(biāo)蛋白或抗原之間的特異性結(jié)合,通過施加磁場,可以快速分離結(jié)合了目標(biāo)分子的磁珠,進(jìn)而實現(xiàn)富集和純化。具有操作簡單、效率高且適用于多種樣本類型的特點,廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)相互作用研究、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路分析、抗體-抗原交互作用研究、生物標(biāo)志物的篩選和驗證等。
圖 4. 磁珠法免疫沉淀示意圖。
免疫共沉淀 (Co-IP)
利用抗體與目標(biāo)蛋白的特異性結(jié)合,將目標(biāo)蛋白和其相互作用的伴侶蛋白共同沉淀出來。當(dāng)使用磁珠作為載體時,抗體被固定在磁珠表面。通過結(jié)合、洗滌和脫附步驟,可以有效分離并富集這些蛋白質(zhì)復(fù)合物,具有高效性、靈活性、操作便捷的優(yōu)點,廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)相互作用研究、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路解析、生物標(biāo)志物篩選、疾病機(jī)制研究等。
圖 5. 磁珠法免疫共沉淀示意圖。
染色質(zhì)免疫共沉淀 (ChIP)
ChIP 是一種將特定抗體與目標(biāo)蛋白結(jié)合的技術(shù),以富集與其相互作用的 DNA 片段,而使用磁珠作為載體可以提高分離效率和操作方便性,同時具備適應(yīng)性強(qiáng)的特點,廣泛應(yīng)用于轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點的鑒定、染色質(zhì)修飾狀態(tài)的研究、基因調(diào)控機(jī)制的解析、疾病模型中的染色質(zhì)狀態(tài)研究等。
圖 6. 磁珠法染色質(zhì)免疫共沉淀示意圖。
蛋白純化
磁珠以其超順磁性和功能化表面,能夠與目標(biāo)蛋白結(jié)合,在應(yīng)用外部磁場的情況下,結(jié)合了目標(biāo)蛋白的磁珠可以被迅速分離,進(jìn)而實現(xiàn)蛋白質(zhì)的富集和純化。配套磁力架使用,降低了操作的復(fù)雜性,減少了對離心設(shè)備的依賴,具有高效性,簡便性,靈活性的優(yōu)點,廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)生物學(xué)研究 (如功能分析、相互作用研究)、藥物篩選和開發(fā)、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能的解析、臨床診斷和生物標(biāo)志物檢測等。
以 IP 為例:
1. 樣品準(zhǔn)備:按照您的實驗需求,可選擇超聲、RIPA 裂解等方案,制備樣本,建議樣本制備時可添加蛋白酶/激酶等抑制劑 (HY-K0010、HY-K0017 等) 增加蛋白穩(wěn)定性。
2. 磁珠準(zhǔn)備:混勻含有保護(hù)液的磁珠,取適量并用平衡液清洗磁珠,利用磁力架進(jìn)行磁性分離。
3. 磁珠-樣品結(jié)合:磁珠、樣品混合孵育,形成磁珠-樣品復(fù)合物。
4. 洗雜:清洗磁珠-樣品復(fù)合物,磁性分離,獲得含有目的蛋白的磁珠。
5. 蛋白洗脫:根據(jù)下游實驗選擇合適的洗脫方式。
6. 目的蛋白收集:磁性分離,移取上清液用于后續(xù)實驗。
7. 蛋白檢測:SDS-PAGE、WB 、質(zhì)譜檢測等。
04
磁珠配對:如何找到最適合你的“魔法搭檔”
基礎(chǔ)磁珠
基礎(chǔ)磁珠的表面可以是裸露的、羧基化的 (-COOH)、氨基化 (-NH2) 的或其他官能團(tuán)修飾。
功能磁珠
功能磁珠的表面通常偶聯(lián)不同的分子使其具有專一功能。
05
貨號 |
產(chǎn)品名稱 |
HY-K0201 |
Anti-HA 磁珠 |
HY-K0201A |
Anti-HA 磁珠 (1 μm) |
HY-K0202 |
蛋白 A/G 磁珠 |
HY-K0203 |
蛋白 A 磁珠 |
HY-K0204 |
蛋白 G 磁珠 |
HY-K0205 |
蛋白 L 磁珠 |
HY-K0206 | Anti-c-Myc 磁珠 |
HY-K0206A | Anti-c-Myc 磁珠 (1 μm) |
HY-K0207 | Anti-Flag 磁珠 |
HY-K0207A | Anti-Flag 磁珠 (1 μm) |
HY-K0208 | 鏈霉親和素磁珠 |
HY-K0209 | Anti-His 磁珠 |
HY-K0210 | His 標(biāo)簽純化凝膠珠 (Ni-NTA) |
HY-K0223 | 羥基磁珠 (200 nm,10 mg/mL) |
HY-K0224 | 氨基磁珠 (200 nm,10 mg/mL) |
HY-K0225 | 羧基磁珠 (200 nm,10 mg/mL) |
HY-K0226 | CHO 磁珠 (200 nm, 10 mg/mL) |
HY-K0227 | NHS 磁珠 (200 nm, 10 mg/mL) |
HY-K0228 | Oligo (dT)30 磁珠 |
HY-K0234 | 谷胱甘肽瓊脂糖磁珠 |
HY-K0236 | Anti-Flag 瓊脂糖磁珠 |
HY-K0237 | Anti-HA 瓊脂糖磁珠 |
HY-K0240 | Ni-IDA 瓊脂糖磁珠 |
HY-K0241 | Ni-NTA 瓊脂糖磁珠 |
HY-K0242 | 蛋白 A Plus 瓊脂糖磁珠 |
HY-K0243 | Anti-GFP 瓊脂糖磁珠 |
HY-K0246 | Anti-GFP 瓊脂糖磁珠 |
參考文獻(xiàn):