• 分子水平實(shí)驗(yàn)多應(yīng)用于基于靶點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)，用于研究待測(cè)化合物對(duì)靶蛋白的抑制作用或結(jié)合活性，目前有多種不同的檢測(cè)方法用于分子水平化合物篩選，可以根據(jù)具體使用目的及研究對(duì)象進(jìn)行選擇。
• 當(dāng)研究靶點(diǎn)未知、靶蛋白難分離純化，或者所檢測(cè)的表型只存在于細(xì)胞水平時(shí)，需要通過(guò)細(xì)胞水平實(shí)驗(yàn)進(jìn)行篩選。細(xì)胞水平實(shí)驗(yàn)可以從細(xì)胞整體水平檢測(cè)化合物對(duì)細(xì)胞的調(diào)控、毒性或細(xì)胞內(nèi)的代謝情況等。

化合物庫(kù)是開(kāi)展高通量篩選的實(shí)驗(yàn)對(duì)象，也是篩選實(shí)驗(yàn)的主體，選擇匹配實(shí)驗(yàn)?zāi)康幕�合物�?kù)是開(kāi)展高通量篩選的關(guān)鍵。

MCE 擁有多樣性實(shí)體化合物庫(kù)，滿足不同篩選需求： 

下面我們就看看在客戶使用 MCE 化合物庫(kù)發(fā)表的文獻(xiàn)中，大家都如何做的篩選實(shí)驗(yàn)吧！

02
案例分享一

第一篇文章是發(fā)表在 Cellular & Molecular Immunology 的 “A SARS-CoV-2-specific CAR-T-cell model identifies felodipine, fasudil, imatinib, and caspofungin as potential treatments for lethal COVID-19”  (IF=24.1)。

 
SARS-CoV-2 誘導(dǎo)的細(xì)胞因子爆發(fā)與 COVID-19 的嚴(yán)重程度和致死率密切相關(guān)。因此，本文作者想要篩選并鑒定出抗炎癥的藥物來(lái)治療 COVID-19。作者通過(guò)構(gòu)建了 SARS-CoV-2-S 蛋白靶向的 CAR-T 細(xì)胞模型 (SARS-CoV-2-S CAR-T) 并用刺突蛋白刺激來(lái)模擬 COVID-19 患者中的 T 細(xì)胞反應(yīng)，即大量的細(xì)胞因子釋放，以及獨(dú)特的記憶性的、耗竭的和調(diào)節(jié)性的 T 細(xì)胞表型。

結(jié)合該細(xì)胞模型和感染表型，作者想通過(guò)高通量篩選鑒定出有效抑制細(xì)胞因子釋放的小分子化合物。通過(guò)基于 ELISA 的 IL8 和 IFNγ 的釋放抑制率篩選，并進(jìn)一步鑒定化合物對(duì) T 細(xì)胞的毒性，最終從 1049 個(gè) FDA 批準(zhǔn)的上市藥物中鑒定出了四個(gè)符合篩選標(biāo)準(zhǔn)的化合物 (圖 1)。后續(xù)的實(shí)驗(yàn)中，作者通過(guò)細(xì)胞以及體內(nèi)實(shí)驗(yàn)也證明了這四個(gè)小分子在臨床早期治療中的潛力[1]。

03
案例分享二

第二篇文章是發(fā)表在 Nature Communications 的 “Domain-specific p53 mutants activate EGFR by distinct mechanisms exposing tissue-independent therapeutic vulnerabilities” (IF=16.6)。

錯(cuò)義突變的 TP53 會(huì)影響其本身的腫瘤抑制功能失效，又能賦予其促癌活性，從而促進(jìn)癌變，因此開(kāi)展 TP53 錯(cuò)義突變的研究至關(guān)重要。

作者發(fā)現(xiàn)影響 p53 的 TAD 或 DBD 的突變會(huì)導(dǎo)致不同的細(xì)胞定位模式和蛋白質(zhì)伴侶。因此作者想通過(guò)高通量篩選，來(lái)測(cè)試 p53 TAD 突變體與 DBD 突變體之間獨(dú)特的蛋白質(zhì)相互作用是否會(huì)影響不同的信號(hào)通路，從而產(chǎn)生不同的促抑癌或致癌效應(yīng)。

為此，作者使用定制的 303 種針對(duì)信號(hào)傳導(dǎo)和代謝途徑的小分子抑制劑庫(kù)進(jìn)行了篩選，以確定并驗(yàn)證 p53 TAD 與 DBD 突變細(xì)胞生長(zhǎng)或存活所獨(dú)特依賴的信號(hào)傳導(dǎo)途徑。

細(xì)胞活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果發(fā)現(xiàn)，選擇性抑制 PI3K/AKT/mTOR 信號(hào)傳導(dǎo)和生物合成會(huì)更明顯地降低 TAD 突變體細(xì)胞和 DBD 突變體細(xì)胞的存活率 (圖 2)。通過(guò) Western Blot 分析顯示，TAD 突變體細(xì)胞中磷酸化的 AKT、S6K、ERK 和 mTOR 水平升高。這些數(shù)據(jù)表明，p53 TAD 與 DBD 突變細(xì)胞的存活或生長(zhǎng)依賴于不同的機(jī)制，并在細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路中表現(xiàn)出不同的激活模式[2]。