大鼠血液及肺組織的微透析采樣技術詳解
采用微透析采樣技術采集并測定大鼠血漿以及肺組織中的藥物濃度，探索其藥動學特點
微透析采樣實驗步驟
1、將大鼠進行麻醉、備皮與消毒。
2、大鼠氣管切開插管，接通小動物呼吸機進行機械通氣，將插管與氣管固定并縫合皮膚。
3、肺探針植入：取出新的肺組織探針，將探針前端半透膜部分置于生理鹽水中， 浸泡15-20分鐘，使半透膜充分浸潤。同時，定位右側胸壁第5、6肋間(大約為劍突上1指半到2指)，沿肋骨間隙斜向切開，用鑷子鈍性分離使肋骨充分暴露。通過止血鉗離斷第5肋骨，使之充分暴露右肺，無損傷鑷輕輕提出右肺中葉，在臟層胸膜上作一小切口，沿切口向肺門方向斜向植入肺組織探針到肺組織內。輕輕復位肺葉，以4-0帶線縫合將探針尾端固定于胸壁，防止脫落，逐層關閉胸腔)。PBS液灌注肺部探針，緩解創(chuàng)傷2h。
4、血管探針植入：取出新的血管探針，將探針前端半透膜部分置于生理鹽水中，浸泡15—20分鐘，使半透膜充分浸潤。同時，沿右側腹股溝斜行切開，用鑷子鈍性分離，使股動脈、股靜脈及股神經(jīng)分離，股靜脈充分游離，帶線結扎股靜脈遠端，股靜脈近端用血管夾阻斷，用剪刀剪取一段長約5mm的24號BD靜脈留置針外層套管，將其一端剪成斜向尖銳口，用lml注射器針頭在股靜脈上作一小切口，將之前準備的套管用鑷子沿切口植入股靜脈中，血管夾松開后，管口可見血液流出，說明操作成功，再次夾上血管夾，血管探針順套管放入股靜脈中，松開血管夾，繼續(xù)緩慢推送入下腔靜脈，股靜脈近心端帶線結扎固定探針尾部。逐層關閉切口。PBS液灌注血管探針，緩解創(chuàng)傷2h。
5、探針相對回收率測定：采用反向透析法測算探針回收率。將1ug／mL被測物標準溶液，以2ul／min恒定速率灌注肺組織 以及血管探針。經(jīng)過50min動態(tài)平衡期后，每間隔10min采樣，收集5份透析液樣品，用以計算探針回收率。灌注液藥物濃度(Cperf)和透析液藥物濃度(Cdial)用高效液相質譜法(HPLC—MS)測定，最終回收率為5份樣品平均值。相對回收率Rdial計算公式：Rdial=(Cperf—Cdial)／Cperf。
6、體內實際藥物濃度(Cu)可由透析液濃度(Cm) 經(jīng)公式Cu=Cm／Rdial轉化獲得。觀察給藥后6小時的大鼠血液及肺組織藥動學變化。
7、探針保存：將血管探針用蒸餾水灌注沖洗30min，沖洗結束后，將探針浸泡于肝素液中保存。
文章來源：
俞鑫. 微透析法研究鹽酸氨溴索對莫西沙星在肺炎鏈球菌肺炎大鼠肺部的藥動學影響[D]. 上海:第二軍醫(yī)大學,2015. DOI:10.7666/d.Y2813045.
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