一,發(fā)光原理
1,生物發(fā)光
用熒光素酶基因標(biāo)記DNA,利用其產(chǎn)生的蛋白酶與底物發(fā)生反應(yīng),產(chǎn)生體內(nèi)自發(fā)光信號。
2,熒光發(fā)光
熒光染料、探針、蛋白受一定波長的激發(fā)光激發(fā)后,發(fā)射出波長大于激發(fā)光波長的熒光信號。
二,操作方法
生物發(fā)光
1、前期需將熒光素酶基因整合到細(xì)胞染色體DNA上以表達(dá)熒光素酶,包括構(gòu)建熒光素酶重組質(zhì)粒,細(xì)胞轉(zhuǎn)染,篩選陽性克隆細(xì)胞株。
2、每次成像前需要注射底物熒光素,實驗成本高。
熒光發(fā)光
1、前期可根據(jù)實驗需求選擇合適的熒光染料、熒光探針、熒光蛋白等,對不同的目標(biāo)基因、蛋白、抗體、化合物等進(jìn)行標(biāo)記。
2、成像前無需注射底物,有合適的激發(fā)光源照射,就可發(fā)出特定波長的發(fā)射光,只要熒光基團(tuán)穩(wěn)定,就可實現(xiàn)隨時激發(fā)、發(fā)光、檢測。
三,應(yīng)用范圍
生物發(fā)光
企業(yè)文化,或稱組織文化,是一個組織由其價值觀、信念、儀式、符號、處事方式等組成的其特有的文化形象,簡單而言,就是企業(yè)在日常運行中所表現(xiàn)出的各方各面。
熒光發(fā)光
光信號可能會隨著細(xì)胞的生長繁殖或?qū)嶒炛芷谘娱L逐漸減弱。但需保持熒光基團(tuán)穩(wěn)定才可穩(wěn)定發(fā)光,在活體或離體組織器官進(jìn)行觀察。
具有更多靈活的標(biāo)記探針可選,應(yīng)用范圍更廣,適合瞬時觀測實驗,如藥物、細(xì)胞在體內(nèi)的分布、靶向和代謝,疾病標(biāo)記物的靶向監(jiān)測等。
生物發(fā)光不同于熒光發(fā)光,依靠酶促反應(yīng)產(chǎn)生自發(fā)光信號,無需激發(fā)光,背景低,信噪比高(相差2-3個數(shù)量級),靈敏度高,且發(fā)光強度與檢測目標(biāo)有良好的線性關(guān)系,可進(jìn)行準(zhǔn)確定量。前期涉及轉(zhuǎn)基因操作,實驗難度較高,實驗過程中需要消耗底物熒光素,實驗成本較高,應(yīng)用范圍較小。
四,逐典D-螢光素鉀鹽優(yōu)勢
1.高純度(HPLC驗證純度≥99%)
2.優(yōu)異的生物發(fā)光性能
3.高溶解度(>40mg/ml)
五,應(yīng)用場景
D-熒光素鉀鹽在不同領(lǐng)域具有多種應(yīng)用場景。其中包括蛋白表達(dá)研究、抗腫瘤或抗病毒藥物研究以及mRNA疫苗開發(fā)等。
蛋白表達(dá)研究:將Luc基因插入需要研究的蛋白中,可用于定量目標(biāo)蛋白在實驗動物體內(nèi)的表達(dá)情況。
抗腫瘤或抗病毒藥物:在腫瘤細(xì)胞或病毒中導(dǎo)入Luc基因,建立腫瘤或病毒感染小鼠模型,注射藥物后,通過活體成像技術(shù)觀測腫瘤大小或病毒感染的變化。
mRNA疫苗開發(fā):在mRNA中插入Luc基因,脂質(zhì)體包裹后注射實驗動物后,可通過活體成像技術(shù)可觀測疫苗的免疫效果。
六,應(yīng)用案例分享