• 蛋白錯(cuò)折疊與神經(jīng)退行性疾病相關(guān)。

• 如何使用微孔板讀板機(jī)來(lái)揭示蛋白錯(cuò)折疊對(duì)神經(jīng)退行性疾病的影響。

許多神經(jīng)退行性疾病都與蛋白質(zhì)錯(cuò)誤折疊有關(guān)。比如朊蛋白錯(cuò)折疊對(duì)朊病毒疾病起到關(guān)鍵作用，阿爾茨海默病涉及大腦中存在兩種錯(cuò)誤折疊的蛋白質(zhì)：β淀粉樣蛋白和tau蛋白，帕金森病的典型特征是大腦中α-突觸核蛋白的積累，亨廷頓舞蹈癥是由一種異常形式的亨廷頓蛋白引起的，錯(cuò)誤折疊的亨廷頓蛋白形成淀粉樣蛋白聚集體，在神經(jīng)元中積聚，進(jìn)而導(dǎo)致神經(jīng)元功能障礙和細(xì)胞死亡。

相比較于超微結(jié)構(gòu)成像、免疫化學(xué)方法，微孔板讀板機(jī)無(wú)疑是通量最高、檢測(cè)速度最快的蛋白錯(cuò)折疊檢測(cè)工具。

蛋白錯(cuò)誤折疊循環(huán)擴(kuò)增（Protein Misfolding Cyclic Amplification, PMCA）

PMCA技術(shù)使用重復(fù)的超聲處理和孵育循環(huán)將細(xì)胞朊病毒蛋白從正常腦基質(zhì)轉(zhuǎn)化為聚集形式。美國(guó)Amprion公司使用獨(dú)有的蛋白錯(cuò)誤折疊循環(huán)擴(kuò)增技術(shù)，檢測(cè)腦脊液和血漿中的α-突觸核蛋白水平來(lái)早期診斷帕金森病。這套方法在BMG Labtech 多功能酶標(biāo)儀內(nèi)完成高速震蕩、孵育以及ThT熒光讀板檢測(cè)錯(cuò)折疊蛋白的聚集。

震蕩誘導(dǎo)蛋白轉(zhuǎn)化的實(shí)時(shí)檢測(cè)Real-Time Quaking Induced Conversion Assay(RT-QuIC) 

RT-QuIC是美國(guó) NIH 科學(xué)家 Dr.Caughey 和 Dr.Atarashi 在 2008 成功研發(fā)出朊病毒快速檢測(cè)技術(shù)，采用ThT探測(cè)蛋白錯(cuò)折疊。該技術(shù)可在 20-68 小時(shí)內(nèi)可檢測(cè)出朊病毒，并且可做到零假陽(yáng)性的準(zhǔn)確度。RT-QuIC測(cè)定為檢測(cè)生物樣本中感染性朊病毒的存在提供了高靈敏度和特異性。此外，RT-QuIC測(cè)定非常適合在早期感染動(dòng)物和自然傳播條件下進(jìn)行測(cè)試。

PA-QuIC系列酶標(biāo)儀，備受廣泛認(rèn)可的RT-QuIC標(biāo)準(zhǔn)分析儀器。德國(guó)BMG LABTECH公司的PA-QuIC系列酶標(biāo)儀是用于檢測(cè)朊蛋白聚集最常用和引用次數(shù)最多的酶標(biāo)儀。2021年歐洲疾控中心發(fā)布了檢測(cè)克雅氏病的實(shí)時(shí)檢測(cè)誘導(dǎo)蛋白轉(zhuǎn)化標(biāo)準(zhǔn)方法，選用了BMG公司的Omega系列進(jìn)行檢測(cè)。

朊病毒RT-QuIC定量分析是神經(jīng)退行性疾病蛋白聚集檢測(cè)的典型檢測(cè)應(yīng)用，目前在世界范圍內(nèi)，超過(guò)90%的用戶都在使用PA-QuIC系列儀器來(lái)檢測(cè)。由于該儀器型號(hào)采用德國(guó)加固工藝制造，擁有非常堅(jiān)固穩(wěn)定的表現(xiàn)性能，專為長(zhǎng)時(shí)間蛋白聚集優(yōu)化設(shè)計(jì)，在長(zhǎng)時(shí)間連續(xù)高轉(zhuǎn)速振蕩情況下，表現(xiàn)性能最為穩(wěn)定，可在50℃高溫，最高轉(zhuǎn)速1100rpm條件下，連續(xù)振蕩時(shí)間至少可達(dá)100小時(shí)以上。這種高轉(zhuǎn)速高溫長(zhǎng)時(shí)間連續(xù)振蕩特點(diǎn)，最適用于朊病毒RT-QuIC定量分析以及其他神經(jīng)退行性疾病蛋白聚集長(zhǎng)時(shí)間動(dòng)力學(xué)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。

總結(jié)

德國(guó) BMG Labtech 公司PA-QuIC系列酶標(biāo)儀擁有多項(xiàng)檢測(cè)功能，當(dāng)中包括熒光、化學(xué)發(fā)光、吸收光和時(shí)間分辨熒光等。精密的德國(guó)工藝設(shè)計(jì)和穩(wěn)定耐用的特性，使得PA-QuIC系列酶標(biāo)儀已成為全球蛋白聚集研究用戶的最佳選擇。

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