單細(xì)胞技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于腫瘤,免疫,發(fā)育生物學(xué),神經(jīng)科學(xué),細(xì)胞治療,藥物研發(fā)及動植物研究中。但并不是所有的組織都適用于單細(xì)胞RNA測序,現(xiàn)階段單細(xì)胞RNA測序研究的一個極大的挑戰(zhàn)仍是如何獲得高質(zhì)量的單細(xì)胞懸浮液?蒲姓邌渭(xì)胞懸液制備儀具有起始組織量小,時間短,細(xì)胞得率高,細(xì)胞活性高的特點。帶加熱功能,對樣品的消化處理過程始終處在恒溫狀態(tài),細(xì)胞得率高達(dá)90%,方便了對真核生物進(jìn)行單細(xì)胞核RNA測序。
此次的實驗樣品為肝組織,肝是人體最大的腺,可分泌膽汁,合成多種蛋白質(zhì)和脂類物質(zhì)。肝細(xì)胞能進(jìn)行物質(zhì)的合成、分解、轉(zhuǎn)化、貯存。作為消化器官,肝臟參與糖、脂類、蛋白質(zhì)三大基本物質(zhì)的代謝。
實驗設(shè)備:單細(xì)胞懸液制備儀 JX-CKSM-4WK
實驗步驟:
1、打開儀器電源開關(guān),將儀器界面中的模塊加熱和熱板加熱點開,將其兩者先預(yù)熱恒溫到37℃左右。
2、將穿刺成長條的樣本剪一部分下來直接放入凈信2ml研磨管中。
3、加入凈信消化酶,旋上蓋子,上下微微晃動研磨管將其組織和消化酶均勻混合。
4、將混合好的研磨管放入加熱模塊中,將其研磨管中的樣品和試劑恒溫至37℃后,再將研磨管放入熱板中,蓋上蓋子。
5、啟動Program 2(25min)
6、待儀器程序時間到之后出現(xiàn)滴滴的提示音,則打開儀器蓋子,取出樣品管
7、將樣品管中的液體和剩下的組織一起倒入過濾管中,然后再加入終止液(避免消化酶將液體中的單細(xì)胞也消化完了),得到的液體,即單細(xì)胞懸液。
實驗效果:
樣品制備前后效果對比圖
以上就是此次單細(xì)胞懸液制備儀對肝組織的研磨全過程,可供大家進(jìn)行參考,需要注意是消化酶和終止液均需要在冷凍環(huán)境下保存,消化酶解凍時需在常溫條件下解凍,不可以放入水浴或者其他加熱儀器中解凍,溫度升高對酶的活性會有很大的影響。