本篇論文采用乙二醇還原法于200攝氏度制備Fe3O4微球；①微乳液法和類 Stöber 法制備核殼式Fe3O4/SiO2復(fù)合微球；②分散聚合法制備羧基改性的核-殼式Fe3O4/PS復(fù)合微球。分別利用①和②建立從大腸桿菌和黑曲霉中提取DNA的實(shí)驗(yàn)方案。

一、核/殼式 Fe3O4/SiO2復(fù)合微球的制備、結(jié)果分析及應(yīng)用
制備：采用微乳液法和類 Stöber 法分別制備核殼式Fe3O4/SiO2復(fù)合微球
結(jié)果分析：1、隨著正硅酸乙酯的增加，微球的粒徑也隨著增大，過(guò)多的正硅酸乙酯會(huì)影響該復(fù)合微球的磁性；醇水比為4：1時(shí)，復(fù)合微球的分散性好，更趨于球形。2、用微乳液法制備的復(fù)合微球殼層厚度為26nm樣品團(tuán)聚比較嚴(yán)重，用超聲波也無(wú)法分散開(kāi)，如果用于生物分離，可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)效果。由Stöber 法制備的復(fù)合微球分散性較好，表面光滑，殼層厚度均勻，在47nm左右，四氧化三鐵磁球被二氧化硅層完全包被在里面。
該復(fù)合微球在DNA純化中的應(yīng)用
應(yīng)用：兩種方法分別提取大腸桿菌質(zhì)粒DNA和黑曲霉染色體DNA，A260/A280均在1.8左右，證明用Fe3O4/SiO2復(fù)合微球提取能得到較純的DNA。

二、羧基改性核/殼式Fe3O4/PS復(fù)合微球的制備、結(jié)果分析及應(yīng)用
制備：采用分散聚合法反應(yīng)結(jié)束后，自然冷卻，分別用蒸餾水和無(wú)水乙醇洗滌，用乙醇抽濾，40°C真空干燥12h，瑪瑙研缽研磨后封存?zhèn)溆谩?br /> 結(jié)果分析：1、Fe3O4的粒徑約為220nm-250nm，包裹的聚苯乙烯殼結(jié)構(gòu)厚度約在30nm左右；2、引發(fā)劑的不同會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成各種影響，例如由過(guò)硫酸銨引發(fā)劑引發(fā)的微球表面包被不明顯，而且周圍有散落的聚苯乙烯微球，經(jīng)過(guò)多次比較，采用了過(guò)氧化苯甲酰為引發(fā)劑；3、超聲波處理能提高在溶液中的分散穩(wěn)定性，以利于磁性聚合物微球的合成；4、AM能提供羧基官能團(tuán)，同時(shí)也能作為表面活性劑和穩(wěn)定劑，可以防止磁球在形成過(guò)程中發(fā)生團(tuán)聚；5、PVP穩(wěn)定劑增加復(fù)合物的半徑減小。
在DNA純化中的應(yīng)用：步驟同 Fe3O4/SiO2復(fù)合微球中的DAN純化步驟一致，所得到的大腸桿菌質(zhì)粒DNA和黑曲霉染色體DNA在紫外分光光度計(jì)下得到的A260/A280比值均大于1.7，且殘液中無(wú)殘留 DNA 分子，說(shuō)明純化率較高。

三、兩種復(fù)合微球在DNA純化中的比較
①10 mg的Fe3O4/SiO2-I和Fe3O4/SiO2-II分別能從40ul大腸桿菌中提取出14.8和16.3ug質(zhì)粒DNA，分別能從40ul絲狀真菌黑曲霉中提取出11.0和13.2ug染色體DNA。②10 mg羧基改性的Fe3O4/PS復(fù)合微球分別能從40ul的大腸桿菌粗體液和絲狀真菌黑曲霉粗體液中提取出13.0ug質(zhì)粒DNA和10.7ug染色體DNA。對(duì)提取出的DNA樣品進(jìn)行了瓊脂糖凝膠電泳和紫外光譜測(cè)定，測(cè)出它們的純度均大于1.753(A260/A280>1.7即可視為純DNA)。
相比較而言，二氧化硅包被的復(fù)合微球分離和純化DNA效果更好。