一，內(nèi)毒素檢測（凝膠法）的原理

酶原 內(nèi)毒素 凝固酶

凝固原 凝固酶 凝固素
 

革蘭氏陰性細菌內(nèi)毒素催化了LAL中酶原的活化。初始活化速率由內(nèi)毒素的濃度決定。活化后的酶（凝固酶）水解了也存在于LAL中的凝血蛋白（凝固原）內(nèi)的特定化合鍵。水解后，產(chǎn)生的凝固素自行聯(lián)合，并形成凝膠狀膠塊。
 

凝膠法是一種用于革蘭氏陰性細菌內(nèi)毒素的限量測試。凝膠法在37℃的水浴或干燥熱塊中放置的試管中操作。孵育一小時后，將試管翻轉(zhuǎn)180°。凝塊牢固地附著在試管底部，表明是陽性反應。如果液體從試管側(cè)面向下流動，則結(jié)果是內(nèi)毒素陰性。
 

二，檢測所需主要設備及材料

試劑

– 鱟試劑（LAL）（PYROGENT™ 試劑）

– 內(nèi)毒素工作標準品（CSE）

– LAL 試劑檢查用水（LRW）(# W50-640, W50-100, W50-500)

器具

– 玻璃稀釋管，13 × 100 mm（# N207）

– 玻璃反應管，10 × 75 mm（# N201, N205）

– 獨立包裝的血清吸管（選購）

– 標簽

請使用經(jīng)內(nèi)毒素試驗驗證合格的無熱原器具。

設備

– 加熱塊或非循環(huán)熱水浴

– 移液器

– 計時器

– 漩渦混合器

– 試管架

三，操作步驟

本指南分步描述了如何進行傳統(tǒng)凝膠法 鱟試劑（以下簡稱LAL）試驗。試驗開始前，先使試劑瓶溫度與室溫相同。

四，注意事項

– 使用配套的LAL和CSE 試劑

– 建議勿使用塑膠管稀釋內(nèi)毒素

– 遵循所有關于內(nèi)毒素漩渦震蕩次數(shù)的建議

– 使用經(jīng)內(nèi)毒素試驗驗證合格的無熱原器具

– 使用前，先使試劑溫度與室溫保持相同

– 不要對LAL進行漩渦震蕩

– 不要污染樣品、標準品、LRW 和器具

– 應正確安裝、驗證并維護設備儀器，避免影響凝膠形成