急性腎損傷（Acute kidney injury，AKI）是一種危及生命的疾病，發(fā)病率和死亡率都很高，而缺血是腎臟損害的主要原因之一。缺血性損傷（Ischemic renal injury，IRI）可引起近端腎小管上皮細胞（Proximal tubular epithelial cells，PTECs）變性、壞死，從而導致急性腎損傷。越來越多的證據(jù)表明，急性腎損傷的核心病理特征是線粒體功能的改變。線粒體NAD+依賴性酶Sirtuin 5（SIRT5）則是線粒體結構和功能的關鍵調節(jié)因子，可調節(jié)能量代謝，并促進包括腎臟在內的高代謝需求器官的線粒體功能。Sirtuin 5已被證明可以增強人體內的心臟、大腦能量代謝，在缺血期間具有保護作用，但其在急性腎損傷中的作用尚不清楚。

 

英國倫敦大學Haschler等人對此進行了研究，試圖確定SIRT5在體外人PTECs（hPTECs）缺血誘導的線粒體功能障礙中的作用，相關成果以“Sirtuin 5 depletion impairs mitochondrial function in human proximal tubular epithelial cells”為題發(fā)表在《scientific reports》上。

線粒體膜電位（ΔΨM）是線粒體結構的核心決定因素之一，是線粒體ATP合成的重要調節(jié)因子，因此確定SIRT5的抑制是否會影響ΔΨM進而減少線粒體ATP的產(chǎn)生至關重要。本研究中，作者采用美國Orflo Technologies公司的Moxi GO快速流式細胞儀來評估hPTECs的ΔΨM變化。研究人員通過RNAi（RNA干擾，RNA interference）技術構建了SIRT5抑制hPTECs實驗組SIRT5 RNAi，并以非靶向siRNA（小干擾RNA，Small interfering RNA）構建的hPTECs為對照組（Control RNAi），進行了對比研究。四甲基羅丹明甲酯（TMRM，一種可吸附活性線粒體探針，用于測定ΔΨM的變化）被用作熒光指示劑。Moxi GO的測定結果顯示，SIRT5 RNAi的TMRM熒光強度更低，表明SIRT5抑制降低了ΔΨM，進而影響了細胞的能量代謝。5個獨立的重復實驗都呈現(xiàn)出高度一致性的結果（如圖1所示）。

結合其他相關實驗，本研究證明了SIRT5是hPTECs中正常線粒體功能所必需的一種關鍵性缺血誘導酶，可調節(jié)hPTECs的線粒體結構和功能，促進代謝穩(wěn)態(tài)，保護線粒體免受破碎和降解，并降低對氧/營養(yǎng)缺乏模型誘導的線粒體功能障礙的易感性；SIRT5耗竭損害了ATP的產(chǎn)生，降低了ΔΨM，并引發(fā)了hPTECs中的線粒體碎裂。

Moxi GO II
 

Moxi GO目前已升級為Moxi GO II，該產(chǎn)品采用庫爾特原理進行細胞計數(shù)和粒徑測量，同時采用488nm激光光源，結合兩個PMT通道，525/45nm通道和561nm/LP（或者646nm/LP，可根據(jù)需要更換），進行細胞活率、細胞凋亡、轉染效率、活性氧簇、線粒體膜電位等常規(guī)流式檢測。儀器設計小巧輕便，無需預熱，開機即用，預設程序，觸屏操控，運行后10秒即可給出測試結果，使用后也無需清潔維護。無論是經(jīng)驗豐富的流式專家，還是初試身手的實驗小白，Moxi Go II都可以助您輕松完成實驗。

美國Orflo Technologies公司是一家非常專業(yè)的細胞分析儀器研發(fā)和制造企業(yè)，擁有多項專利技術，產(chǎn)品以庫爾特原理的高精細胞計數(shù)儀和超快流式細胞儀為主。

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https://doi.org/10.1038/s41598-021-94185-6

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