Moxi Go II快速流式細(xì)胞儀助力疾病的個性化診斷
 

傳染性疾病的個性化診斷：需要持續(xù)監(jiān)測疾病的動態(tài)發(fā)展，目前推薦的臨床策略即收集患者的關(guān)鍵生物標(biāo)志物的多重數(shù)據(jù)，并對其進(jìn)行縱向頻繁監(jiān)測�，F(xiàn)在諸多技術(shù)，如流式細(xì)胞術(shù)、靜態(tài)顯微鏡等，都可以進(jìn)行樣本監(jiān)測分析，但是檢測量有限，無法滿足生物標(biāo)志物多重檢測的需求，而且設(shè)備操作和數(shù)據(jù)處理都很復(fù)雜。我們需要一種設(shè)計簡潔，數(shù)據(jù)處理簡單，可同時針對多種物種的生物標(biāo)志物靶向的檢測方案。

 

作為一種革命性的工具，阻抗細(xì)胞術(shù)設(shè)計簡潔，可直接或間接對微米及納米級樣本顆粒進(jìn)行檢測而不破壞樣本，已廣泛應(yīng)用于多個領(lǐng)域，尤其是細(xì)胞狀態(tài)評估和疾病診斷。然而， 該技術(shù)在識別多個物種時，需要在準(zhǔn)確性和快速分析之間進(jìn)行權(quán)衡。這對于復(fù)雜疾病進(jìn)行個性化患者分層，需要同時多重生物標(biāo)志物檢測來講，仍然存在困境。

來自新澤西州立大學(xué)的Brandon K Ashley團(tuán)隊研究了一種新的多路阻抗細(xì)胞術(shù)機(jī)制，采用電敏感微粒，使用單一檢測源靶向、識別白細(xì)胞上的膜受體，相關(guān)研究成果以“Antibody-functionalized aluminum oxide-coated particles targeting neutrophil receptors in a multifrequency microfluidic impedance cytometer“為題，于2022年發(fā)表在《Lab chip》上。

這項研究使用了一種涂有不同厚度金屬氧化物（10nm和30nm的Al₂O₃）的Janus顆粒（metal oxide-coated Janus particles，MOJPs），當(dāng)它進(jìn)入電場時，會置換相同體積的電介質(zhì)液體，改變系統(tǒng)的阻抗，產(chǎn)生可量化檢測的阻抗偏移。每個MOJP在不同的輸出頻率下都有一個特定幅度的偏移，使用多頻阻抗細(xì)胞術(shù)，可以通過一種共面電極方案快速測量和區(qū)分這些顆粒。研究者用CD11b抗體功能化10nm厚度的MOJPs，用 CD66b抗體功能化30nm厚度的MOJPs，然后將顆粒與分離的中性粒細(xì)胞結(jié)合以測量受體的表達(dá)，所得結(jié)果同時與流式細(xì)胞檢測結(jié)果進(jìn)行對比。研究發(fā)現(xiàn)包括多元分析、監(jiān)督機(jī)器學(xué)習(xí)和無監(jiān)督機(jī)器學(xué)習(xí)在內(nèi)的數(shù)據(jù)分析技術(shù)的組合能夠準(zhǔn)確區(qū)分樣本，準(zhǔn)確率高達(dá)91%。

本研究中流式分析檢測采用了Orflo Technologies公司的Moxi Go II快速流式細(xì)胞儀。按照廠商提供的protocol，將20μL等分的FITC-CD66b抗體或PE-CD11b抗體溶液加入到100μL  1X PBS（約1.0x10⁵個細(xì)胞/mL）稀釋的中性粒細(xì)胞中，避光孵育。在Moxi Go II上選擇“Open Flow Cytometry”，選擇FITC通道和PE通道，在設(shè)備完成自動校準(zhǔn)后，上樣60μL樣品。檢測結(jié)果如圖1和表1所示。

圖1. Moxi Go II檢測結(jié)果：CD11b表達(dá)（用藻紅蛋白或PE染色）和CD66b表達(dá)（用異硫氰酸熒光素或FITC染色）的流式細(xì)胞檢測散點(diǎn)圖
 

No expression (Q1)	CD11b+ only (Q2)	CD66b+ only (Q3)	CD11b+ & CD66b+ (Q4)
35.3%	27.7%	4.3%	32.7%

這項概念研究證明了氧化物涂層顆粒對特定白細(xì)胞計數(shù)的潛力，不同的涂層厚度或不同的金屬氧化物材料，有望在同一樣品中測量不同的細(xì)胞和不同的細(xì)胞受體。此系統(tǒng)樣本處理簡單，可以更快速，更自動化地分析生物標(biāo)志物，具有更高的多重分析潛力，可能會改善重癥監(jiān)護(hù)中的疾病診斷。

 

Moxi GO II采用庫爾特原理進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)和粒徑測量，同時采用488nm激光光源，結(jié)合兩個PMT通道，525/45nm通道和561nm/LP（或者646nm/LP，可根據(jù)需要更換），進(jìn)行細(xì)胞活率、細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)染效率、活性氧簇、線粒體膜電位等常規(guī)流式檢測。

儀器設(shè)計小巧輕便，無需預(yù)熱，開機(jī)即用，預(yù)設(shè)程序，觸屏操控，運(yùn)行后10秒即可給出測試結(jié)果，使用后也無需清潔維護(hù)。無論是經(jīng)驗豐富的流式專家，還是初試身手的實驗小白，Moxi Go II都可以助您輕松完成實驗。

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https://pubs.rsc.org/en/content/articlelanding/2022/lc/d2lc00563h


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