近些年，以干細(xì)胞治療為基礎(chǔ)的再生醫(yī)學(xué)逐漸發(fā)展起來(lái)。間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cell, MSC）作為干細(xì)胞的一種，正受到全世界科學(xué)家的關(guān)注。

間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）是一類(lèi)存在于多種組織（如骨髓、臍帶、胎盤(pán)、脂肪等），具有自我更新能力和多向分化潛力的成體干細(xì)胞。具有易獲取、低免疫原性、低致瘤性、良好增殖率等多個(gè)特點(diǎn)，因在免疫調(diào)節(jié)和組織再生上的巨大潛力而受到更多的關(guān)注。

Duc M Hoang教授2022年發(fā)表了一篇綜述[1]，對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）在各系統(tǒng)疾病治療領(lǐng)域的最新臨床研究成果進(jìn)行了系統(tǒng)性的總結(jié)，包括神經(jīng)系統(tǒng)疾病、肺功能障礙、代謝/內(nèi)分泌相關(guān)疾病、生殖障礙、皮膚燒傷和心血管疾病等。文中提到，在臨床試驗(yàn)中，MSC治療是安全的，不過(guò)仍需要進(jìn)行大規(guī)模的臨床試驗(yàn)。MSC來(lái)源特異性的疾病治療也是研究者關(guān)注的一個(gè)方向。

截止2023年8月底，我國(guó)已有近70種MSC藥物獲得藥物臨床試驗(yàn)申請(qǐng)（IND）受理（數(shù)據(jù)來(lái)源于國(guó)家藥品監(jiān)督管理局藥品評(píng)審中心），涉及較多的適應(yīng)癥，包括膝骨關(guān)節(jié)炎、間質(zhì)性肺病、移植物抗宿主病及急性呼吸窘迫綜合征。

圖1：MSC來(lái)源及分化（來(lái)源：DOI:10.1080/17474124.2018.1393332）

在間充質(zhì)干細(xì)胞的研究中，細(xì)胞的鑒定是很重要的一個(gè)環(huán)節(jié)。

自1991年MSC的概念提出后，科學(xué)家們使用不同的分離培養(yǎng)方法，用不同的標(biāo)志物來(lái)研究MSC，沒(méi)有形成統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn)，增加了MSC研究的難度。因此，國(guó)際細(xì)胞治療協(xié)會(huì)（ISCT）在2006年定義了MSC的最低標(biāo)準(zhǔn)[2]，是目前被廣泛接受的一種鑒定方法， 如Table1所示：

層浪LongCyte™流式細(xì)胞儀檢測(cè)MSC表面標(biāo)志物的數(shù)據(jù)。

實(shí)驗(yàn)方案：

圖2：MSC表面標(biāo)志物配色方案

染色步驟：

Part.1
取傳代培養(yǎng)的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（h UCMSCs），胰酶消化收集細(xì)胞，加入PBS調(diào)整細(xì)胞濃度為10 x106 cells/ mL；

Part.2
取7個(gè)流式管，每管分別加100ul細(xì)胞懸液，空白管不加抗體，其余的管按照抗體使用說(shuō)明書(shū)分別加入相應(yīng)熒光抗體CD90-FITC、CD105-PE、CD73-APC、CD45-PE-Cy7、CD34-APC-Cy7、HLA-DR-AF700，混勻，室溫避光孵育30 min；

Part.3
加2mlPBS，1500r，離心5 min，棄上清液，加入300ulPBS重懸細(xì)胞；

Part.4
上流式細(xì)胞儀，檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)志物的表達(dá)。

數(shù)據(jù)展示：

圖3：MSC表面標(biāo)志物檢測(cè)（A：主細(xì)胞群；B-G：分別是陽(yáng)性指標(biāo)CD73、CD105、CD90和陰性指標(biāo)HLA-DR、CD34、CD45的百分比）

圈門(mén)邏輯：

01通過(guò)FSC-H/SSC-H設(shè)門(mén)，排除碎片，圈出主細(xì)胞;

02建立直方圖，橫坐標(biāo)分別選擇CD73、CD105、CD90、HLA-DR、CD34、CD45；

03在儀器軟件上選擇圖層編輯功能，與空白管對(duì)應(yīng)指標(biāo)的直方圖進(jìn)行疊加，得到每個(gè)指標(biāo)的百分比。

總結(jié):

1.層浪LongCyte™流式細(xì)胞儀軟件操作簡(jiǎn)單，可直接獲得峰形疊加圖，進(jìn)行歸一化和平滑處理，對(duì)流式圖進(jìn)行美化處理；

2.有批量操作功能，可批量自動(dòng)上樣，批量分析數(shù)據(jù)，批量導(dǎo)出流式圖，節(jié)約整體實(shí)驗(yàn)時(shí)間。層浪臨床型LongCyte™3光14色流式細(xì)胞儀可滿(mǎn)足多種熒光染料同時(shí)使用，歡迎大家使用層浪流式細(xì)胞儀，共同探索更多的多色流式檢測(cè)方案。 

  圖4：層浪生物L(fēng)ongCyte™3光14色流式細(xì)胞儀

參考文獻(xiàn)：

（1）Duc M. Hoang , Phuong T. Pham,etal.Stem cell-based therapy for human diseases.
Signal Transduct Target Ther.2022 Aug 6;7(1):272.

（2）Dominici, M，Le Blanc, K,etal.Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement.

（3）F Gao 1, S M Chiu,etal.Mesenchymal stem cells and immunomodulation: current status and future prospects.Cell Death Dis,2016 Jan 21;7(1):e2062.

（4）Hajir Ibraheim 1, Chiara Giacomini,etal.Advances in mesenchymal stromal cell therapy in the management of Crohn's disease.Expert Rev Gastroenterol Hepatol,2018 Feb;12(2):141-153.