HUGO-GT™全基因組人源化小鼠的介紹與應用
人源化小鼠由于在模擬人類生理和病理特征方面表現(xiàn)出更強的相關性，逐步成為疾病研究工具的首選。但當前普遍使用的部分基因人源化小鼠在探討遺傳疾病致病機理或藥物研發(fā)方面存在明顯不足，如Tg的隨機插入及建系復雜性和人源化區(qū)域不足性等。如果要更深入地研究致病機理，就需要用上長片段甚至全基因組人源化小鼠。
為此，賽業(yè)生物啟動了HUGO-GTTM（Humanized Genomic Ortholog for Gene Therapy）計劃，基于自主研發(fā)的TurboKnockout-Pro技術，對鼠源基因?qū)崿F(xiàn)原位替換，成功構建了涵蓋更豐富干預靶點的全基因組人源化小鼠。HUGO-GTTM小鼠搭載了更高效的大片段載體融合技術，可以作為萬能模板進行針對性的突變定制服務，是更貼近真實世界生物機制的藥物臨床前研究模型。
人源化模型的發(fā)展演變
HUGO-GTTM全基因組人源化模型推薦
已完成驗證的HUGO-GTTM全基因組人源化小鼠
即將推出的HUGO-GTTM全基因組人源化小鼠
HUGO-GTTM全基因組人源化模型優(yōu)勢
在DMD、RHO等疾病基因治療管線中，有多例使用人源化疾病模型進行臨床前藥物研發(fā)的成功案例。賽業(yè)生物自主研發(fā)的HUGO-GTTM模型不僅能代替已有模型滿足大部分藥企的臨床前實驗需求，并且能更好地用于藥物臨床前研發(fā)，特別是對于基因序列完整性具有高要求的ASO、CRISPR和siRNA等多種基因治療藥物。
更高效的藥物篩選
HUGO-GTTM模型的人源化區(qū)域與人類所攜帶的致病基因一致，并被小鼠良好地兼容，該質(zhì)控數(shù)據(jù)已通過內(nèi)部研發(fā)數(shù)據(jù)驗證；且基于深入的管線調(diào)研，人源化區(qū)域覆蓋大部分藥物靶點；我們的CRO服務團隊對臨床藥物靶點具備扎實的理論和豐富的項目服務經(jīng)驗，可提供全方位的項目支持以快速推進藥物篩選進程。
致病基因的全長覆蓋
賽業(yè)生物自主研發(fā)的TurboKnockout技術與BAC融合技術攻克了基因組大片段替換的難點，可實現(xiàn)復雜模型的基因編輯，對疾病熱門突變區(qū)域?qū)崿F(xiàn)全基因覆蓋（包括外顯子、內(nèi)含子及兩端UTR區(qū)域），HUGO-GTTM較傳統(tǒng)模型的人源化程度更高，可以滿足大多數(shù)藥企及科研人員的項目需求，且沒有專利及產(chǎn)權糾紛。
個性化定制
基于HUGO-GTTM豐富項目經(jīng)驗和專業(yè)研發(fā)團隊，賽業(yè)生物可提供高效的全基因組人源化定制服務，不僅可以定制長達350Kb的大片段基因定點打靶，還可在已有的HUGO-GTTM野生型全基因組人源化ES細胞上進行基因再修飾，快速獲得疾病模型，構建時間更短，陽性率更高，為研究提供更理想的對照組和實驗組動物模型。
HUGO-GTTM全基因組人源化模型研究案例：B6-htau小鼠
額顳葉癡呆（Frontotemporal lobar dementia, FTD）是僅次于阿爾茲海默病的第二大類早發(fā)型癡呆，已明確的FTD致病基因包括MAPT、FUS和TARDBP等。MAPT基因編碼微管相關蛋白tau，該蛋白主要分布在神經(jīng)元軸突中，對于微管的穩(wěn)定和組裝起著至關重要的作用。
B6-htau品系是小鼠Mapt基因人源化模型，通過基因編輯技術將小鼠Mapt基因替換為包含3'UTR區(qū)域的人源MAPT基因，可用于額顳葉癡呆（FTD）和阿爾茲海默癥（AD）等多種神經(jīng)退行性疾病的研究。
（1）人源MAPT基因表達的檢測
野生型小鼠（WT）和B6-htau小鼠（hMAPT）腦部和腎臟中人源MAPT基因表達檢測
通過QPCR檢測WT小鼠與B6-htau小鼠中人源MAPT基因的表達，結(jié)果顯示在B6-htau小鼠的腦部和腎臟均存在人源MAPT基因的表達，而WT小鼠體內(nèi)不存在人源MAPT基因的表達。（ND：Not detected）
（2）鼠源Mapt基因表達的檢測
圖3 野生型小鼠（WT）和B6-htau小鼠（hMAPT）腦部和腎臟中鼠源Mapt基因表達檢測
通過QPCR檢測WT小鼠與B6-htau小鼠中鼠源Mapt基因的表達，結(jié)果顯示在WT小鼠的腦部和腎臟均存在鼠源Mapt基因的表達，而B6-htau小鼠體內(nèi)不存在鼠源Mapt基因的表達。
（3）人源tau蛋白的表達
野生型小鼠（WT）和B6-htau小鼠（hMAPT）腦部中人源tau表達的檢測
通過Western blot檢測WT小鼠與B6-htau腦部中人源tau蛋白的表達，顯示人源tau蛋白在B6-htau小鼠的大腦中顯著表達，而在WT小鼠中未見明顯的表達。
