雖然免疫檢查點(diǎn)阻斷療法已被證明在部分癌癥中非常成功，但這些療法的靶點(diǎn)并不存在于大多數(shù)乳腺癌中。目前的研究仍不能解釋為什么乳腺癌中的免疫檢查點(diǎn)表達(dá)有限，在這類癌癥中如何激活免疫系統(tǒng)仍是一個(gè)沒(méi)有明確答案的問(wèn)題。盡管在乳腺癌中缺乏可用作治療靶點(diǎn)的免疫檢查點(diǎn)，轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果顯示大部分乳腺癌顯示出免疫活性，一半以上的乳腺癌顯示出中到高度的淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，75%的乳腺癌含有三級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)（TLS）。
 
新出現(xiàn)的證據(jù)表明，腫瘤細(xì)胞外基質(zhì) (ECM) 除了在調(diào)節(jié)腫瘤本身功能和周圍基質(zhì)行為方面的已知作用外，還可能在腫瘤-免疫相互作用中發(fā)揮作用。具有高免疫浸潤(rùn)的乳腺腫瘤具有獨(dú)特的 ECM 特征，并且 T 細(xì)胞排斥與特定的 ECM 特征有關(guān)。此外，在乳腺腫瘤中發(fā)現(xiàn)的少數(shù)特定 ECM 或 ECM 相關(guān)分子，包括半乳凝素1和3、TGFβ 和層粘連蛋白332與免疫抑制有關(guān)，這表明 ECM 和 ECM 相關(guān)分子可以在抗腫瘤免疫中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。這些證據(jù)提出了靶向調(diào)節(jié)腫瘤-ECM相互作用，以增強(qiáng)免疫治療療效，并增加患者從這些療法中受益的可能性。此外，既往研究表明EMC中的膠原蛋白會(huì)促進(jìn) PD-1/PD-L1 抗性，整合素 αVβ6 和 αVβ8 被認(rèn)為可調(diào)節(jié)免疫逃避。
 
盡管一系列的研究表明免疫浸潤(rùn)和腫瘤基質(zhì)之間存在聯(lián)系，但尚不清楚 ECM 是否可以直接影響免疫系統(tǒng)清除腫瘤的最終步驟。為了研究ECM底物是否具有控制 T 細(xì)胞清除惡性乳腺癌細(xì)胞的能力，來(lái)自美國(guó)勞倫斯利弗莫爾國(guó)家實(shí)驗(yàn)室的研究人員對(duì)此進(jìn)行了研究，并將研究成成果“Extracellular matrix modulates T cell clearance of malignant cells in vitro“發(fā)表在的Biomaterials雜志上。 
 
在文章中，研究者比較了培養(yǎng)的惡性細(xì)胞與來(lái)自健康動(dòng)物的不匹配的 T 細(xì)胞的存活率，結(jié)果顯示雖然纖連蛋白或玻連蛋白促進(jìn)了有效的腫瘤清除，但膠原蛋白 4 (Col4) 抑制了 T 細(xì)胞介導(dǎo)的殺傷。RNAseq 顯示 T 細(xì)胞相關(guān)基因的表達(dá)被培養(yǎng)基加入Col4后抑制，免疫抑制細(xì)胞因子被培養(yǎng)基加入Col4后上調(diào)。體內(nèi)數(shù)據(jù)也顯示，與 Col4 高劑量區(qū)的 T 細(xì)胞相比，Col4 貧乏區(qū)的 CD8+ T 細(xì)胞更可能接觸非分裂期腫瘤細(xì)胞，提示該基質(zhì)蛋白可能在乳腺癌的“免疫冷”表型中起關(guān)鍵作用。
 
 
 為了確定 Col4膠原蛋白與體內(nèi) T 細(xì)胞功能之間的關(guān)系，研究人員對(duì)在 BALB/c 同基因宿主中原位生長(zhǎng)的 MCC 腫瘤的組織切片進(jìn)行了PhenoCycler（原CODEX）10個(gè)標(biāo)志物免疫熒光原位成像實(shí)驗(yàn)。通過(guò)Akoya空間單細(xì)胞蛋白組（PhenoCycler）技術(shù)觀察到 CD4+ 和 CD8a+ T 細(xì)胞與腫瘤周圍和腫瘤實(shí)質(zhì)中的血管結(jié)構(gòu)高度關(guān)聯(lián)，如 CD4和 CD8a 與 CD31 的共定位所示(圖A)。研究發(fā)現(xiàn)，平均而言CD4+ 或 CD8+ 細(xì)胞比 CD4- 和 CD8- 細(xì)胞更高的更傾向于出現(xiàn)在 Col4 染色周圍（圖B）。進(jìn)一步通過(guò)使用無(wú)偏聚類來(lái)識(shí)別腫瘤內(nèi)的非T細(xì)胞群，研究人員發(fā)現(xiàn)了兩個(gè) CD31 血管系統(tǒng)群和三個(gè) Ki67 和 MHC 表達(dá)不同的腫瘤細(xì)胞群（圖D和E）。之后進(jìn)行了空間分析以確定細(xì)胞群之間的接觸頻率（圖 G 和 H）。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與 Col4Hi T 細(xì)胞相比，Col4Lo T 細(xì)胞更可能顯示 Ki-67 染色并且不太可能接觸復(fù)制的腫瘤細(xì)胞，這與轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果一致。

 
 本研究結(jié)合了體外實(shí)驗(yàn)與體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，應(yīng)用了轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，Akoya空間單細(xì)胞蛋白組技術(shù)（PhenoCycler）進(jìn)行超多重?zé)晒獬上褚约皢渭?xì)胞測(cè)序等多種方法，對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)對(duì)腫瘤-免疫細(xì)胞相互作用的影響進(jìn)行研究，補(bǔ)充了腫瘤微環(huán)境研究中細(xì)胞外基質(zhì)作用的研究，為復(fù)雜的腫瘤微環(huán)境研究提供了新的視野。使用PhenoCycler單細(xì)胞原位空間組學(xué)技術(shù)進(jìn)行超多重免疫熒光原位成像，可以在組織原位標(biāo)記多種研究靶標(biāo)，并對(duì)靶標(biāo)的表達(dá)強(qiáng)度，其所代表的細(xì)胞亞型的空間位置關(guān)系和相互作用進(jìn)行深入研究。
 
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相關(guān)文獻(xiàn)
1.Extracellular matrix modulates T cell clearance of malignant cells in vitro. Biomaterials. Volume 282, March 2022, 121378.
 
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