肝酯酶（Hepatic lipase，HL）試劑盒使用說明書
肝酯酶（Hepatic lipase，HL）試劑盒說明書
分光光度法50管/24樣
注 意 ：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義：
肝酯酶是脂肪分解酶，在肝實質(zhì)細(xì)胞中合成，存在于肝臟竇周間隙內(nèi)皮細(xì)胞表面和竇周間隙腔面的肝細(xì)胞微絨毛表面，可促進(jìn)脂蛋白中的膽固醇向類固醇激素轉(zhuǎn)化，血漿中的HL活性增高時，血漿中小顆�？蓪�(dǎo)致LDL水平升高，加速動脈粥樣硬化的發(fā)生。
測定原理：
肝酯酶水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生α-萘酚，可與固藍(lán)B鹽形成紫紅色偶氮化合物，在595nm有特征吸收峰，顏色深淺在一定范圍內(nèi)與肝酯酶活性成正相關(guān)。
自備實驗用品及儀器：
天平、冷凍離心機(jī)、研缽、水浴鍋、可見分光光度計、1 mL玻璃比色皿。
試劑組成和配制 ：
試劑一：液體75mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體3mL×1瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體20mL×1瓶，4℃保存。
試劑四：液體3mL×1瓶，4℃避光保存。
樣品處理：
- 組織：按照質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL試劑一）加入試劑一，冰浴勻漿后于4℃，10000g離心10min，取上清待測。
- 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一）加入試劑一，冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后于4℃，10000g離心10min，取上清待測。
- 血清：直接測定。
測定操作：
| 對照管 | 測定管 | |
| 樣品（μL） | 100 | 100 |
| 試劑一（μL） | 450 | 400 |
| 試劑二（μL） | 50 | |
| 混勻，30℃水浴10min | ||
| 試劑三（μL） | 400 | 400 |
| 試劑四（μL） | 50 | 50 |
| 充分混勻，30℃靜置5min，于1mL玻璃比色皿，蒸餾水調(diào)零，測定595nm處吸光值，記為A對照管和A測定管，△A=A測定管- A對照管 | ||
計算公式
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y= 0.1519 x -0.1241，R2=0.9994
1．按照蛋白濃度計算
酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生1μmol α-萘酚為一個酶活力單位。
HL活性（μmol /min/mg prot）= （△A+0.1241）÷0.1519×V反總÷（V樣×Cpr）÷T= 6.58×（△A+0.1241）÷Cpr
2．按照樣本質(zhì)量計算
酶活性定義：每克組織每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生1μmol α-萘酚為一個酶活力單位。
HL活性（μmol /min /g 鮮重）= （△A+0.1241）÷0.1519×V反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T= 6.58×（△A+0.1241）÷W
3．按照細(xì)胞數(shù)量計算
酶活性定義：每104個細(xì)胞每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生1μmol α-萘酚為一個酶活力單位。
HL活性（μmol /min /104 cell）= （△A+0.1241）÷0.1519×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）÷T= 6.58×（△A+0.1241）÷細(xì)胞數(shù)量
4．按照液體體積計算
酶活性定義：每毫升血清每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生1μmol α-萘酚為一個酶活力單位。HL活性（μmol /min /mL）=（△A+0.1241）÷0.1519×V反總÷V樣÷T= 6.58×（△A+0.1241）
V反總：反應(yīng)總體積，1mL；V樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積，0.1mL；W：樣本質(zhì)量，g；V樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時間，10min
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